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Merck
CN

弧菌检测

霍乱弧菌造成人类霍乱,而副溶血性弧菌创伤弧菌是海产品相关肠胃炎的主要原因。

弧菌是运动型弯曲或逗号形杆菌,具有单个极性鞭毛和片状蛋白质。它们通常存在于开放水域、淡水和咸水中。弧菌是兼性好氧菌和革兰氏阴性菌,不形成孢子。新陈代谢可以是氧化和发酵。大多数菌种是氧化酶阳性的,但梅契尼柯夫弧菌除外。有些弧菌,如费氏弧菌,在某些条件下表现出生物发光(群体感应)特性。在大多数情况下,弧菌接近肠杆菌科,但也与假单胞菌共有一些特性。它们可以通过氧化酶阳性反应和运动性与肠道细菌区分开来。可以基于弧菌耐受氧化和发酵代谢的能力来与假单胞菌区分。

大多数弧菌都不需要复杂营养,葡萄糖等简单的碳源就能作为它们的能量来源。由于是典型的海洋生物,大多数弧菌菌种需要2-4%的NaCl或其他盐以及海水中存在的微量元素,即可实现最佳生长。有些弧菌菌种就像假单胞菌一样,可以使用多种能量来源,并在新陈代谢中表现出极大的多样性。

弧菌分离广泛采用的培养基是 TCBS 琼脂和碱性蛋白胨水;然而,伴随的蔗糖发酵细菌可能在鉴定TCBS琼脂上的弧菌菌种时造成问题[3]。TCBS琼脂含有溴百里酚蓝和百里酚的混合指示剂。该系统在蔗糖发酵产生酸时起反应。在像HiCrome弧菌琼脂这样的显色培养基上(表2),弧菌菌种的显色不受其他细菌菌落存在的影响。这是因为,显色的量取决于细菌性β-半乳糖苷酶与培养基中所含底物的反应。TCBS琼脂还含有硫代硫酸钠和柠檬酸铁指示系统,可检测硫化氢的产生。

源自动物的蛋白胨为弧菌菌种提供含碳物质、含氮物质和必需营养素,以促进生长。培养基中高浓度的氯化钠用于对伴随的微生物群产生抑制作用。硫代硫酸钠、柠檬酸钠和胆酸钠也用于抑制革兰氏阳性菌和一些革兰氏阴性菌的生长,但不抑制肠杆菌科细菌。培养基的强碱性pH也是获得弧菌菌种选择性的重要工具。

创伤弧菌

图 1.创伤弧菌是造成与海产品相关的死亡的原因。西北渔业科学中心的科学家们已经分离并鉴定了一种关键的表面蛋白,这种蛋白参与了创伤弧菌附着在贝类上的能力,例如牡蛎(来自美国西雅图西北渔业科学中心的显微图像)

霍乱弧菌是一种非侵入性细菌,通过产生霍乱肠毒素来影响小肠。由于肠细胞中腺苷酸环化酶的活化作用,造成危及生命的腹泻。该反应导致血液和组织中的水和电解质被泵入肠道。流体的快速流失导致脱水、无尿、酸中毒和休克。过多的钾离子流失可导致心脏并发症和循环衰竭。如果不及时治疗,死亡率非常高(50-60%)。感染源是被人类粪便污染的水或食物。

HiCrome弧菌琼脂

图 2.HiCrome弧菌琼脂是一种选择性琼脂,带有作为鉴别系统的显色系统。

副溶血性弧菌引起肠胃炎。它是一种侵入性生物,主要影响结肠组织,并分泌目前尚未鉴定的毒素。在大多数情况下,感染源又会回到受污染的原料、未适当冷藏的海产品、被粪便污染的水和食物。

创伤弧菌生活在温暖的海水中,并且嗜盐,这意味着它们需要盐来生长。生的或未煮熟的受污染海产品通常是感染源,会造成胃肠炎,这是一种称为“原发性败血症”的综合症。暴露于海水的开放性伤口可导致伤口感染。

典型的生化反应

表1.典型的生化反应

 品牌货号名称ISO
非选择性培养基Sigma-Aldrich43856碱性蛋白胨水 (ISO)8914
 Sigma-Aldrich77185蛋白胨水 
 Sigma-AldrichT2117巯基肉汤 
非选择性培养基Sigma-Aldrich62895赖氨酸脱羧酶盐肉汤 
带有鉴别系统Sigma-Aldrich75315OF试验营养琼脂 
 Sigma-Aldrich22091含补剂的胰蛋白酶大豆琼脂 
 Sigma-Aldrich43856TTC溶液8914
选择性培养基Sigma-Aldrich49281葡萄糖Teepol盐肉汤 
选择性培养基Sigma-Aldrich4385617134 CPC-琼脂(基础) 
带有鉴别系统Sigma-Aldrich70135DCLS琼脂 
 Sigma-Aldrich90035DCLS 琼脂 2 号 
 Sigma-Aldrich92323HiCrome™ 弧菌琼脂 
 Sigma-Aldrich86348TCBS琼脂8914
表2.用于富集、检测和分化弧菌菌种的培养基
品牌产品编号名称
Sigma-AldrichP9602多粘菌素B选择性补剂
Sigma-Aldrich17779TTC溶液
表3.弧菌培养基的补剂
品牌产品编号名称
Sigma-Aldrich18502遵循Gordon-McLeod的氧化酶试剂
Sigma-Aldrich40560氧化酶试纸条
Sigma-Aldrich70439氧化酶试验
Sigma-Aldrich07345遵循Gaby-Hadley的氧化酶试剂A
Sigma-Aldrich07817遵循Gaby-Hadley的氧化酶试剂B
Sigma-Aldrich49940ONPG片
Sigma-Aldrich51138硝酸盐试剂纸片盒
Sigma-Aldrich38497硝酸盐试剂A
Sigma-Aldrich39441硝酸盐试剂B
Sigma-Aldrich77730革兰氏染色试剂盒
表4.用于鉴定和分化弧菌的生化产品及试剂盒

参考文献

1.
Thompson FL, Austin B, Swings J. 2006. The Biology of Vibrios. https://doi.org/10.1128/9781555815714
2.
Alcamo E. (2001). Fundamentals of Microbiology, Inc.. 6th ed, Jones and Bartlett Publishers,. pg 254, 244 .
3.
(1998). Clesceri, Greenberg and Eaton (ed.), Standard Method for the Examination of Water and Waste Water, 20th ed. American Public Health Association, Washington, D. C. .
4.
Hara-Kudo Y, Nishina T, Nakagawa H, Konuma H, Hasegawa J, Kumagai S. 2001. Improved Method for Detection of Vibrio parahaemolyticus in Seafood. Appl. Environ. Microbiol.. 67(12):5819-5823. https://doi.org/10.1128/aem.67.12.5819-5823.2001
5.
ISO 8914:1990, Microbiology -- General Guidance for the Detection of Vibrio parahaemolyticus.
6.
(1997). Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, . 5th edition, Lippincott Williams &Wilkins .
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