使用 Amicon^® Ultra 离心超滤管快速浓缩抗体

简介

免疫球蛋白纯化方案通常包括与Protein A或Protein G层析介质的亲和吸附、未吸附蛋白洗涤以及低pH缓冲液洗脱。所得纯化抗体通常稀释度较高，不适合下游研究或长期储存。通常需要通过透析浓缩抗体，和/或置换可保留蛋白质活性的缓冲液。洗滤可更快实现相同结果，免疫球蛋白回收率高达 99%，并且一步除盐（请参阅浓缩、脱盐和缓冲液置换方案）。

方法和结果

使用 Prosep^® A 和 Prosep^® G Montage^® 抗体纯化试剂盒和 Amicon^® Ultra-15 mL离心超滤管纯化和浓缩兔 IgG。

A. 使用 Montage^® 试剂盒纯化 IgG

1. 用 10 mL 结合缓冲液平衡 Prosep^® A 或 Prosep^® G 树脂填料，并 500 xg 离心 5 分钟
2. 通过 0.22 µm Steriflip^® GP 滤膜预澄清血清样品。
3. 用结合缓冲液 A 1:1 稀释样品，并 100-150 x g 离心设备 20 分钟。
4. 用 20 mL 结合缓冲液 A 洗涤离心柱，500 x g 离心柱 5 分钟去除未结合的污染物。
5. 将 10 mL 洗脱缓冲液 B2 加入含有 1.3 mL 中和缓冲液的新鲜离心管中，洗脱样品。
6. 使用适当的浓度测定方法（例如测定 280 nm 处的紫外线吸光度）测定样品的总蛋白浓度。

B. 使用 Amicon^® Ultra-15 30kDa MWCO 装置浓缩 IgG

1. 将中和的洗脱组分加入 Amicon^® Ultra 15 mL 30 kDa MWCO 装置。
2. 在吊桶式转子中 4000 x g 离心 10 至 20 分钟，在固定角转子中 5000 x g 离心 10 至 20 分钟，直到样品达到所需的浓度。