一种简单的超滤法蛋白富集

人血浆蛋白质组是生物标志物发现和研究的广阔资源。过去一般采用凝胶过滤色谱法按大小来分离蛋白溶液^1,2。然而，凝胶过滤法耗时耗力，并受到样品大小制约。还会严重稀释样品。超滤法则没有这些局限，据报道^3–5，其适合作为样品制备方法，制备低分子量(<10 kDa)蛋白进行生物标志物分析。本文描述了使用Amicon^® Ultra离心超滤管纯化含10%胎牛血清混合液中的细胞色素c。

方法

在本实验中，离心超滤管可用于富集血清中的低分子量(LMW)和高分子量(HMW)组分。通过逐级过滤法（图1），使用截留分子量(MWCO)从100 kDA至10 kDa MWCO逐步递减的Amicon^® Ultra 4 mL离心超滤管分离蛋白。

结果

逐级富集法相比使用低MWCO装置的直接过滤法，可实现蛋白的分段分离并提高通量（图2）。相比传统的直接过滤法，富集法制备的样品纯度更高（图3）。数据表明，逐级超滤法是基于大小的实用蛋白富集方法。