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主页蛋白质标记和修饰Amicon® Ultra超滤管纯化抗体标记反应物

Amicon® Ultra超滤管纯化抗体标记反应物

使用Amicon® Ultra标准式离心超滤管,无需稀释样品,只要经过几轮洗滤操作,就能有效去除抗体标记反应中的未结合标记物。可按下列步骤通过离心超滤管去除未反应的荧光标记。

去除抗体标记反应后的未结合荧光标记物

  1. 分别将1 mg荧光标记抗体组成的2 mL溶液加入2支Amicon® Ultra-4 mL 10 kDa MWCO超滤管,4000 x g下离心10分钟。
  2. 加水将截留液(每支约50 μL)重新稀释至2 mL并再次离心。重复此步骤两次。
  3. 每次离心后,保留截留液和滤过液样品,以供SDS-PAGE分析和紫外-可见光分光光度法定量。

结果

FITC标记BSA的SDS-PAGE电泳图

图 1.FITC标记BSA在洗滤前和每次洗滤后(共4次)的SDS-PAGE电泳图。起始材料和首次滤过液中可见游离FITC。1次超滤后去除大部分游离标记,后续超滤后基本不见游离FITC。图2的荧光检测数据可证实该结果。

游离FITC信号减少约80%

图 2.1次超滤后,游离FITC信号减少约80%,后续超滤后信号减少98%。说明超滤可取代凝胶过滤用于蛋白标记反应物的纯化。

材料
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