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主页蛋白质浓缩和缓冲液置换使用 Amicon® Ultra 离心超滤管快速浓缩抗体

使用 Amicon® Ultra 离心超滤管快速浓缩抗体

简介

免疫球蛋白纯化方案通常包括与Protein A或Protein G层析介质的亲和吸附、未吸附蛋白洗涤以及低pH缓冲液洗脱。所得纯化抗体通常稀释度较高,不适合下游研究或长期储存。通常需要通过透析浓缩抗体,和/或置换可保留蛋白质活性的缓冲液。洗滤可更快实现相同结果,免疫球蛋白回收率高达 99%,并且一步除盐(请参阅浓缩、脱盐和缓冲液置换方案)。

方法和结果

使用 Prosep® A 和 Prosep® G Montage® 抗体纯化试剂盒和 Amicon® Ultra-15 mL离心超滤管纯化和浓缩兔 IgG。

A. 使用 Montage® 试剂盒纯化 IgG

  1. 用 10 mL 结合缓冲液平衡 Prosep® A 或 Prosep® G 树脂填料,并 500 xg 离心 5 分钟
  2. 通过 0.22 µm Steriflip® GP 滤膜预澄清血清样品。
  3. 用结合缓冲液 A 1:1 稀释样品,并 100-150 x g 离心设备 20 分钟。
  4. 用 20 mL 结合缓冲液 A 洗涤离心柱,500 x g 离心柱 5 分钟去除未结合的污染物。
  5. 将 10 mL 洗脱缓冲液 B2 加入含有 1.3 mL 中和缓冲液的新鲜离心管中,洗脱样品。
  6. 使用适当的浓度测定方法(例如测定 280 nm 处的紫外线吸光度)测定样品的总蛋白浓度。

B. 使用 Amicon® Ultra-15 30kDa MWCO 装置浓缩 IgG

  1. 将中和的洗脱组分加入 Amicon® Ultra 15 mL 30 kDa MWCO 装置
  2. 在吊桶式转子中 4000 x g 离心 10 至 20 分钟,在固定角转子中 5000 x g 离心 10 至 20 分钟,直到样品达到所需的浓度。
使用 Amicon Ultra-15 装置浓缩兔 IgG。使用 Montage PRSEP-A pr PROSEP-G 抗体纯化试剂盒纯化 IgG。线条显示 IgG 体积减少,而柱状图显示 20 分钟离心时间后 IgG 浓度成比例增加。

图 1.使用 Amicon Ultra-15 装置浓缩兔 IgG。使用 Montage PRSEP-A pr PROSEP-G 抗体纯化试剂盒纯化 IgG。线条显示 IgG 体积减少,而柱状图显示 20 分钟离心时间后 IgG 浓度成比例增加。

使用 Amicon Ultra-15 装置浓缩前后的纯化兔 IgG 的 SD-PAGE 凝胶结果。

图 2.使用 Amicon Ultra-15 装置浓缩前后的纯化兔 IgG 的 SD-PAGE 凝胶结果。

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