Duolink^®邻位连接技术(PLA)多色试剂盒在灵敏的多重蛋白检测中的应用

使用DUOLINK^® PLA试剂盒与试剂套装实现蛋白互作多色可视化和定量

蛋白质互作检测

蛋白质互作通常在细胞间和细胞内通讯的激活和传导中发挥着关键作用，影响细胞的多种功能和行为。然而，如何准确地检测固定组织和细胞中的蛋白互作往往比较棘手，尤其是涉及低丰度蛋白或微弱互作的蛋白复合物时。随着各种荧光染料的发现和检测技术的不断创新，多个研究领域都由于细胞内蛋白互作的认识而取得了巨大进展。这些互作检测加深了对蛋白功能的理解，并为健康和疾病组织的无数信号通路提供了关键洞见。Duolink^® PLA多色技术可以在固定组织和细胞中同时对多种不同的蛋白互作进行可视化检测和定量。¹

Duolink^® PLA多色技术

作为一种高效的蛋白检测解决方案，Duolink^® PLA多色试剂盒可同时可视化检测和定量多达4种不同的蛋白互作事件。每种蛋白互作检测都需要2种高特异性一抗。通过探针制备技术，将每种一抗与一条寡核苷酸链直接偶联，制成一对正负PLA邻位探针。当每对正负PLA探针足够靠近彼此时(<40nM)，加入聚合酶后DNA连接成环，并进行滚环扩增反应，生成由多达1000个模板拷贝组成的连环单链。 接着添加标记的寡核苷酸或检测探针与扩增子内的互补序列杂交，使每种蛋白检测事件的扩增信号最高放大1000倍。多指标的Duolink^® PLA多色技术可通过绿色、橙色、红色和远红四种颜色同时检测最多4种蛋白事件的稳定和微弱互作蛋白（图1）。重要的是，采用标准的高内涵筛选成像仪、流式细胞仪或成像流式细胞仪均可完成成像和数据分析。

Duolink^® PLA多色技术 与细胞通路分析

研究蛋白质互作和细胞通路的工具囊括了各种各样的方法和技术。其中比较常用的荧光染料和荧光显微镜涉及重组蛋白的使用，以及细胞或组织内信号的共定位。但重组蛋白与共定位成像技术的应用有所局限，并且不易获得天然状态下的蛋白互作数据。另外，研究复杂信号通路介导的各种疾病可能需要分析蛋白质细微的翻译后修饰或检测磷酸化/非磷酸化蛋白。采用Duolink^® PLA多色技术即可有效地分析翻译后修饰或其他修饰的蛋白质互作。

通过Duolink^® PLA多色技术多指标研究受体酪氨酸激酶HER家族

受体酪氨酸激酶的HER家族由4个成员组成： EGFR（HER1或ErbB1）、HER2(ErbB2)、HER3 (ErbB3)和HER4(ErbB4)。很多类型的癌症中都出现这些蛋白的过表达或突变，引起研究者的极大兴趣。²多重Duolink^® PLA多色技术具有高特异性且能同时检测多达4种蛋白互作，适合高效可视化复杂的信号通路，例如EGFR通路（图2）。

具体实验细节详见Duolink^® PLA多色检测方案。