酵母生长实验方案

酵母因能够快速生长并具有分散的细胞而被认为是用于真核生物研究的模范系统。此外，可以相对容易地完成酵母细胞的复制铺板和突变分离，并且它们也具有明确的遗传系统。最为重要的是，酵母具有高度多功能的DNA转化系统，可有效用于蛋白质的生产。

酵母通常在YPD培养基中生长。YPD中的“Y”指酵母提取物，含有酵母强制自消化时产生的水溶性化合物。“P”指蛋白胨，是用蛋白酶消化动物蛋白而制备的肽和氨基酸混合物。“D”指右旋糖或葡萄糖，是酵母的碳源。YPD含有必需的营养成分，可以满足细胞的代谢需求。然而，某些培养基需要指定成分，为了满足应用需求，多种合成培养基应运而生。合成培养基可根据实验需要调整不同成分。

• 酵母在不同培养基中的生长方案
• 酵母菌株保存与复苏
• 酵母培养
  • 酵母培养基
  • 合成营养缺陷型添加剂
  • 其他酵母培养补剂

酵母在不同培养基中的生长方案

下面给出的实验方案可用于在液体和固体培养基中生长和维持酵母。

YPD肉汤中的酵母生长

1. 将50 g YPD肉汤（货号Y1375h）悬浮于1L蒸馏水中。
2. 在121 °C下高压灭菌15分钟
3. 在装有制备液体培养基的无去垢剂的培养管 / 培养瓶中接种酵母培养物（来自酵母肉汤 / 培养板）。培养基不应超过培养管容量的三分之一或培养瓶总容量的五分之一
4. 略微涡旋内容物以分散细胞。
5. 在振动培养箱中以300 rpm（对培养瓶）或350 rpm（对培养管）孵育培养物

YPD琼脂中的酵母生长

1. 将65 g YPD琼脂（货号Y1500）悬浮于1L蒸馏水中。
2. 在搅拌的同时加热至沸腾以完全溶解所有成分
3. 在121 °C下高压灭菌15分钟
4. 将约25-30 mL琼脂培养基倒入无菌培养板中，置于层流室中待其凝固
5. 在琼脂板上划线（来自于YPD板的酵母）/ 涂布（来自于肉汤的酵母）细胞，并在30 °C下孵育

注意：在大约24小时后可以观察到单个酵母菌落，但在其可用于复制接种之前，需要孵育48小时以上。在使用合成的营养缺陷型培养基补剂的情况下，酵母培养物的生长速率约慢50％。

酵母菌株保存与复苏

使用上述方法培养的酵母细胞可以在甘油中在-70 °C下冷冻保存3年以上，或在营养丰富的斜面培养基中在4 °C下保存6个月至一年。含有酵母细胞的YPD板用Parafilm®密封后也可以在4 °C下保存2-3个月。保存和复苏酵母细胞的实验方案如下：

酵母细胞保存

1. 配制30％（w / v）无菌甘油溶液（货号G5516）。
2. 将1.0 mL甘油溶液加入到4 mL有螺旋盖的无菌小管中。
3. 取1.0 mL早期为静止期 / 后期为对数增殖期的酵母肉汤，从刚培养好的板上刮下大量接种物
4. 重悬于1 mL 30％无菌甘油溶液中
5. 混合，在干冰上冷冻，并保存于-70 °C下

注意：酵母细胞在8％（v / v）二甲基亚砜（DMSO，货号D8418）中的储存方法类似。

酵母菌株复苏

1. 用无菌牙签或细菌接种针刮擦冷冻的原液
2. 将酵母细胞划在合适的培养板上，并在30 °C下孵育

注意：避免解冻原液。如果原液解冻，则需要充分涡旋再重新冷冻。

酵母培养

酵母通常在30 °C下在YPD或合成培养基中生长。我们可专门针对您的应用，提供粉末和液体形式的生长培养基和补充剂。