低压液相色谱
低压液相色谱(LPLC)分析技术利用低压驱动流动相通过填充固定相的色谱柱,通过差分分配分离复杂混合物。这种方法最初使用常压柱,利用重力驱动样品通过填料床,因此又称“常压柱液相色谱法”。通过不同的LPLC模式,可根据化学性质(如大小、电荷或亲和力)分离化合物,从而精密高效地纯化化合物。
这种方法具有无损制备特性,主要用于研究蛋白质、多肽和单克隆抗体等生物大分子。通常,LPLC可保留样品供后续研究使用。LPLC还具有其他优点,如设计简单,虹吸能力强,对检测器、低压泵和组分收集器等仪器要求不高。它的多用途性使其成为制药、生物技术、食品饮料、环境监测和研究领域不可或缺的工具。此外,LPLC使用的压力更低、溶剂更少,还符合绿色化学原则。
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吸附色谱
吸附色谱又称液-固色谱,通过在支撑物(固定相)表面吸附和解吸来保留化学物质。吸附剂构成固定相,溶质通过范德华力和立体相互作用与之结合。由于吸附位点通常位于固定相外表面上,因此需要使用相对较小的颗粒作为固定相。二氧化硅、氧化铝、活性炭、Florisil、聚酰胺、天青石和硅藻土是常用的吸附剂。
分配色谱
分配色谱法通过在两种不相溶的液体之间分配组分实现分离。一种是液体流动相,另一种是固定在固体支撑物上的液体。可用作固体支撑物的材料包括硅胶、硅藻土、纤维素、聚四氟乙烯(PTFE)和聚苯乙烯。惰性固体支撑物为液体固定相提供了较大的表面积。
亲合色谱
亲和色谱法通过选择性、可逆性的相互作用(如抗体-抗原、酶-底物或激素-受体相互作用),以其中一种相互作用物作为固定相,分离相应组分。“亲和配体”是固定在丙烯酸珠、琼脂糖和Toyopearl树脂等固体支撑物上的相互作用物,即亲和柱的固定相。
凝胶过滤色谱
这种方法又称尺寸排阻色谱,可分离不同大小的分子,如不同大小和低聚物形式的蛋白质。其固定相是由特定孔隙的交联珠子基质组成的树脂。凝胶过滤柱含有聚丙烯酰胺、琼脂糖、葡聚糖珠,或此类珠子混合物。它可部分或全部进入色谱柱填料颗粒内的孔隙,从而分离较小的分析物。
疏水作用色谱(HIC)
疏水作用色谱(HIC)根据表面的疏水性差异,分离生物分子。此方法基于与色谱柱树脂(如丁基、辛基或苯基)相连的非极性疏水基团与生物分子上的疏水基团之间的相互作用。由于更不易造成变性且所用基质更少,这种方法广泛用于在保留生物活性的同时分离蛋白质。
离子交换色谱(IEX)
离子交换色谱根据分子表面的净电荷差异来分离分子。纤维素、二氧化硅或苯乙烯-二乙烯基苯等基质的表面与带电官能团共价连接。树脂固定的离子交换基团与带相反电荷的分子之间相互作用。在阳离子交换色谱中,流动相中带正电荷的物质与带负电荷的离子交换树脂结合。在阴离子交换色谱中,流动相中带负电荷的物质与带正电荷的离子交换树脂结合。
低压液相色谱系统
低压液相色谱(LPLC)系统通常由一个装有分离用固定相的色谱柱、一个驱动流动相以可控流速通过色谱柱的泵和一个测量色谱柱流出洗脱液的检测器组成。
LPLC系统还配有一个进样系统,以将样品引入流动相流,并确保进样精密、可重现。部分系统还配有一个组分收集器,收集分离出的成分以便进一步分析。
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