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一般描述
由布罗德研究所（Broad Institute）Feng Zhang实验室开发的人类GeCKO v2（双载体系统）文库，包含100,000多个独特的gRNA，用于人类基因组的基因敲除。利用lenti CRISPR双载体的混合文库将只会表达gRNA（利用lentiGuide-Puro载体），与版本1相比，该系统可产生100倍以上的高滴度病毒。lentiGuide-Puro库仅能用于已整合了Cas9的细胞（单独使用enti-Cas9-Blast载体进行生成）。Sigma的向导RNA型慢病毒人类GeCKO库分装为8管，每管25 ul，最低滴度为5X10^8 TU/ml（由p24试验检测）。每个物种特异性的文库被作为2个1/2文库（A和B）进行交付。建议同时对A和B文库进行筛选，从而使每个基因对应6个sgRNA（每个文库提供3个sgRNA）。两个文库均含有1000个非靶标对照sgRNA。A文库也会靶向miRNA（每个miRNA对应4个sgRNA）。
应用
功能基因组学/筛选/靶标验证
特点和优势
- 使用CRISPR核酸酶敲除蛋白质编码基因，从而可对蛋白质功能进行评估
- 可在实验室中实现对人类全基因组（16,000多个基因）的有效筛选，无需机器人或特殊设备
- 大量内在的富集和缺失克隆，使研究人员对实现混合筛选实验结果更自信
- 慢病毒CRISPR可感染多种不同的哺乳细胞，它通过将单导向RNA转导至表达Cas9的人类细胞中，促进筛选应用中的基因敲除。
- 将人类GeCKO版本2文库的双载体系统用于已将Cas9整合到基因组中的人类细胞。
- 转导后，使用嘌呤霉素gRNA筛选。
制备说明
每mL的Puro Kill Curve和Determining CFU（克隆形成单位）。在进行文库规模的筛选前，必须进行2次预实验。请访问Sigma.com/pooledscreening。
其他说明
该产品仅供研发使用，不可用作药物、家庭使用或其他用途。请查阅物质安全资料表，获取危险和安全操作规范信息。尽管生产的慢病毒转导颗粒是不可复制的，但仍然建议将其作为生物危害等级2级（RGL−2）生物体在实验室中进行处理。请遵循所有已发表的RGL-2指南，进行实验室废物处理和净化。
WGK
WGK 3
闪点(°F)
Not applicable
闪点(°C)
Not applicable
法规信息
高风险级别生物产品--病毒，疫苗等
商品
Lentiviral vector systems prioritize safety features, with design precautions preventing replication. Good handling practices are essential for use.
Get tips for handling lentiviruses, optimizing experiment setup, titering lentivirus particles, and selecting helpful products for transduction.
获取处理慢病毒、优化实验设置、测定慢病毒颗粒滴度以及选择实用转导产品方面的贴士。
实验方案
Lentivirus versions of genome modification technologies support successful CRISPR, RNAi, and ORF experiments.
FACS sorts cells based on light scattering and fluorescence for objective cell analysis.
我们的科学家团队拥有各种研究领域经验，包括生命科学、材料科学、化学合成、色谱、分析及许多其他领域.
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