| 备选抗生素 | 货号 | 浓度范围 |
|---|---|---|
| 放线菌素D | A9415 | 5 – 10 µg/mL |
| 硫酸博来霉素 | B8416 | 10 – 50 µg/mL |
| 羧苄青霉素 | C3416 | 100 – 1000 µg/mL |
| 氯霉素 | C3175 C1919 | 5 – 50 µg/mL |
| G 418二硫酸盐 | A1720 G1279 | 100 – 800 µg/mL |
| G 418二硫酸盐溶液 | G8168 | 100 – 800 µg/mL |
| 硫酸庆大霉素 | G1264 | 50 – 1000 µg/mL |
| 庆大霉素溶液 | G1272 G1397 G1522 | 50 – 1000 µg/mL |
| 潮霉素B | H3274 H9773 | 200 – 800 µg/mL |
| 硫酸卡那霉素 | K1377 | 100 – 1000 µg/mL |
| 卡那霉素溶液 | K0254 K0129 | 100 – 1000 µg/mL |
| 丝裂霉素 C | M4287 M7949 M5353 | 10 – 100 µg/mL |
| 霉酚酸 | M3536 | 25 µg/mL |
| 新霉素三硫酸盐 | N6386 N3144 | 10 – 100 µg/mL |
| 新霉素溶液 | N1142 | 10 – 100 µg/mL |
| 硫酸诺尔斯菌素 | N0186 | 75 – 100 µg/mL |
| 硫酸巴龙霉素 | P8692 P5057 | 100 – 1000 µg/mL |
| 嘌呤霉素 | P8833 | 10 – 100 µg/mL |
| 嘌呤霉素溶液 | P9620 | 10 – 100 µg/mL |
| 利福平 | R7382 | 10 – 50 µg/mL |
杀灭曲线实验方案
以下实验方案概述了绘制细胞杀灭曲线的步骤。
准备物品：
- 健康状态的目标细胞系
- 您的细胞系建议的完全培养基（培养基 + 血清）
- 您感兴趣的备选抗生素
步骤：
- 通过胰蛋白酶或温和刮取，收获健康的贴壁细胞。
- 用完全培养基稀释细胞悬液，接种到 96 孔板各孔中，终体积为 100 ul。处理当天建议的细胞密度约为 50%。
- 24孔板中抗生素处理前的典型细胞密度：
- 0.8 – 2.5 X 105各细胞/ml贴壁细胞
- 2.5 – 4.5 X 105个细胞/ml 悬浮细胞
- 37 oC孵育过夜，或直至所有细胞均调整良好且健康。
注意：细胞处于活跃分裂状态时，抗生素最有效。 因此，建议采用最优细胞密度，以实现最准确的剂量响应。
图 1.示意图 - 备选抗生素浓度。
- 用含不同浓度备选抗生素的新鲜培养基置换培养基。参照96孔板形式（图 1）所示，每个浓度维持一式三份。
- 每48小时更换含抗生素的培养基。
- 培养细胞7-10天，定期在光学显微镜下观测细胞。根据所用细胞系，培养时间可延长至14天。
- 第10天，通过MTT测定法或准确的细胞计数器测定各孔细胞活率。
- 选择完全阻止细胞生长的抗生素浓度。在所有转染实验中，基于该浓度筛选可进一步生长为稳定细胞系的耐受性转染细胞（图2）。
图 2.模拟抗生素杀灭曲线
材料
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