Warburg-Christian法测定蛋白质

1.目的

建立Warburg-Christian法蛋白质含量测定的标准化操作流程。

2.范围
本操作流程适用于所有需要通过Warburg-Christian法进行蛋白测定的产品。

3.定义
纯水 -产自去离子系统的水，电阻率>或=18 MΩ•cm @ 25 °C

4.讨论
N/A

5.责任
分析服务实验室人员应遵守本书面操作流程。

6.安全
请参见有害物质的材料安全数据表（MSDS）和适当的操作处理注意事项。

7.流程

7.1 条件：
T = 25 °C，A260 nm和A280 nm，光程 = 1 cm

7.2 方法：
光谱法

7.3 试剂：
蛋白质样品溶液（样品）

在合适的缓冲液或纯净水中制备含有约0.3 mg蛋白质/mL样品的溶液。

7.4 测试方法
在合适的比色皿中读取样品相对于适当的空白对照的A_260nm和A_280nm。为获得有效的结果，A_280nm必须大于A_260nm。NAD或NADP的存在将会影响蛋白的A_260nm和A_280nm，因此必要时须在计算前对其进行校正。

8.计算

mg蛋白/mL = [(1.31 x A280) - (0.57 x A260)] x 稀释因子

*用于NAD或NADP的校正

9.参考文献及附件
Warburg, O. and Christian W. (1941) Biochem.Z. 310, 384-421