过滤前培养基准备
粉末培养基及盐混合物极具吸湿性,应注意防潮。单个包装的全部粉末应尽可能在打开后立即使用。不建议制备浓缩形式的培养基,可能会形成沉淀。补充剂可在过滤前加入,也可无菌加入除菌后培养基。补充剂的性质可能会影响培养基的储存条件和保质期。
操作流程
- 量取约90%最终所需体积的组织细胞培养级水。水应为室温。
- 边温和搅拌,边加入粉末培养基或盐混合物。搅拌至溶解。水切勿加热。
- 用少量水冲洗原装袋子,洗出所有残留粉末。加到溶液中。
- 如下表所示,按制备培养基终体积每升所需量加入碳酸氢钠。搅拌至溶解。
- 搅拌时,将pH调至比目标pH值低0.1-0.3,真空过滤时pH会升高。建议用1 N HCl或1 N NaOH调节。
- 用组织细胞培养级水将培养基定量至终体积。
- 立即用0.2微米孔或更小的滤膜过滤除菌。
- 无菌分装至无菌容器中。低温(2-8 °C)避光保存配好的液体培养基。
- 渗透压会随着氯化钠或氯化钾的加入而改变,300 mg/L NaCl或400 mg/L KCl对应渗透压变化为10 mOsm。
材料
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