PSF-T7-T7 启动子质粒

PSF-T7-T7 启动子质粒允许使用 T7 噬菌体聚合酶转录 RNA。如果您使用的是体外转录试剂盒，那么使用该载体产生的 RNA 将是开盖的，而不是多聚腺苷酸化的，使其不适合在哺乳动物细胞中表达，但是有些试剂盒可用于添加这些 mRNA 特征。PSF-T7-T7 启动子也可用于在含有 T7 聚合酶的细胞系中诱导基因表达。

几乎所有的 SnapFast 载体在多克隆位点下游都含有一个 T7 终止子，将使转录终止。如果需要，载体也可以在基因末端 3 个引物的酶切站点进行酶切，以允许聚合酶还原，而不是利用发夹 T7 终止子。如果您要在不含痘苗病毒的哺乳动物T7系统中表达您的基因，则由于所产生的 RNA 上缺少 5 个 prime cap，因此需要在基因上游提供IRES。

启动子表达水平：

基因克隆：已将该质粒设计为与多种克隆技术兼容。多重克隆位点包含一系列标准的常用限制性酶切位点。使用这些位点，可以使用标准的DNA连接酶克隆方法插入基因。也可以使用其他方法，例如不依赖连接酶的克隆（LIC）Gibson Assembly InFusionHD或Seamless GeneArt，并且由于我们所有的质粒都基于相同的堆叠，所以可以使用相同的方法克隆到我们所有的目录载体中。

多克隆位点注意事项：MCS中有一些重要的位点。这些包括NcoI位点、XbaI位点以及BsgI和BseRI位点。NcoI位点含有紧邻在Kozak和Shine-Dalgarno核糖体结合位点下游的起始密码子。当起始密码子置于该位置时可实现基因的最佳定位。如果不需要这样并且您希望使用一个下游的位点进行基因克隆，您可通过使用KpnI切割质粒来去除NcoI位点。

XbaI位点含有终止密码子。该终止密码子位于与紧邻在下游的BsgI和BseRI位点相关的特定位置。当BseRI或BsgI切割质粒后，它们会从XbaI位点的终止密码子产生一个TA突出，而其可与采用相同位点切割的所有肽标签质粒相兼容。BseRI和BsgI位点是非回文并远离其结合位点切割特定数量碱基的。

每当我们将基因克隆到我们的多克隆位点时，我们总是将起始和终止密码子定位在MCS中相同的位置。如果基因的起点和终点与NcoI和XbaI不相容，我们会将序列扩展到最近的外部位点，但仍保持起始和终止密码子的位置一致。

如需查看本品的序列信息，请访问 www.gelifesciences.com产品网页。

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