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一般描述
由博德研究所（Broad Institute）Feng Zhang实验室开发的人类GeCKO v2（一体化载体）文库，包含100,000多个独特的gRNA，用于人类基因组的基因敲除。 利用慢病毒CRISPR一体化的带有嘌呤霉素筛选标记物的Cas9和gRNA共表达载体，与版本1相比，版本2载体可产生10倍以上的高滴度病毒。 人类单个载体系统GeCKO文库分装为8管，每管25 ul，最低滴度为5X10^8 TU/ml（由p24试验检测）。 GeCKO人类文库被作为2个1/2文库（A和B）进行交付。建议同时对A和B文库进行筛选，从而使每个基因对应6个sgRNA（每个文库提供3个sgRNA）。 两个文库均含有1000个非靶标对照sgRNA。A文库也会靶向miRNA（每个miRNA对应4个sgRNA）。
应用
功能基因组学/筛选/靶标验证
特点和优势
- 使用CRISPR核酸酶敲除蛋白质编码基因，从而可对蛋白质功能进行评估
- 可在实验室中实现对人类全基因组（16,000多个基因）的有效筛选，无需机器人或特殊设备
- 大量内在的富集和缺失克隆，使研究人员对实现混合筛选实验结果更自信
- 慢病毒CRISPR可感染多种不同的哺乳细胞，通过共同表达1个密码子经优化的Cas9核酸酶和1个单导向RNA，促进基因敲除。
- 将人类GeCKO版本2文库的单载体系统用于无法将Cas9转导至人类细胞（如原代细胞）中的应用。
- 转导后，使用嘌呤霉素进行筛选。
制备说明
Puro Kill曲线和每毫升CFU（菌落形成单位）的测定。在进行文库规模的筛选之前，必须进行两个预实验。详见Sigma.com/pooledscreening。
其他说明
本产品仅供研&发使用，不得用于药物、家庭或其他用途。有关危险和安全处理方法的信息，请参阅材料安全数据表。尽管产生的慢病毒转导颗粒不能复制，但建议在实验室操作中将其视为2级风险（RGL-2）物种。遵循所有已发布的RGL-2实验室处理和废物净化指南。
储存分类代码
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 3
闪点(°F)
Not applicable
闪点(°C)
Not applicable
法规信息
高风险级别生物产品--病毒，疫苗等
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商品
Deconvolute pooled shRNA samples post-screening to identify significant TRC clones with our service.
我们的科学家团队拥有各种研究领域经验，包括生命科学、材料科学、化学合成、色谱、分析及许多其他领域.
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