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TRANSRTRO

Roche

转录酶

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About This Item

UNSPSC代码:
41106313
NACRES:
NA.21

重组

expressed in E. coli

质量水平

100

检测方案

≥90% (SDS-PAGE)

形式

liquid

用途

sufficient for 25 reactions
 sufficient for 50 reactions
 sufficient for 500 reactions

比活

0.05 U/mg

特点

dNTPs included: no
hotstart: no

制造商/商品名称

Roche

包装

pkg of 200 reactions (03531287001)
pkg of 25 reactions (03531317001)
pkg of 50 reactions (03531295001)

技术

RT-PCR: suitable
RT-qPCR: suitable

颜色

colorless

pH值（酸碱度）

7.2

溶解性

water: miscible

适用性

suitable for molecular biology

UniProt登记号

Q9JG39

应用

genomic analysis
life science and biopharma

检测方法

probe-based

异质活性

DNase activity, none detected
Nicking activity, none detected
RNase activity, none detected

储存温度

−20°C (−15°C to −25°C)

相关类别

一般描述

一种重组逆转录酶，用于在热循环仪和实时PCR仪器上进行两步RT-PCR，以稳定转录最高达14 kb的RNA片段。
在逆转录病毒中，如人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1），逆转录酶是核心酶。HIV-1 RT由两个亚单位66 kDa和51 kDa（p66和p5l组成）。一种HERV-K家族的人类内源性逆转录病毒，可编码逆转录（RT）酶。

应用

Transcriptor逆转录酶设计用于使用传统热循环仪和实时PCR仪器（例如LightCycler®仪器）转录各种来源的RNA（mRNA、总RNA、病毒RNA,以及体外-转录RNA），用于以下应用：

  • 合成第一链cDNA用于后续扩增反应
  • 富含GC的RNA模板的RT-PCR
  • cDNA合成期间Cy3、Cy5、DIG、生物素和氨基烯丙基标记
  • 根据RACE检索和克隆mRNA的第5′端和第3′端
  • 带大量嵌入物的cDNA文库的生成
  • DNA双脱氧测序
  • RNA测序
  • DNA片断3′端标记
  • 用于基因组足迹的单链探针的生成
  • 人类乳突病毒E6的RNA、皮层和纹状组织、贝克肌营养不良样本的肌肉活检以及卵母细胞和人类大脑微血管内皮细胞(hCMVEC)的miRNA的逆转录。

生化/生理作用

人类免疫缺陷病毒1型逆转录酶（HIV-1 RT）对于将单链病毒RNA催化转化为整合到宿主细胞染色体中的双链线性DNA至关重要。

特点和优势

  • 实现两步RT-PCR的高度灵敏度。
转录器逆转录酶用于常规热循环仪和实时PCR仪器（例如，LightCycler®仪器）。
  • 获取更多全长转录本，最大14 kb。
可以生成带有大插入片段的cDNA文库。
  • 反向转录困难的模板。
该酶在高温下工作良好，从而克服了RNA二级结构（如富含GC的RNA模板），有利于优化反应条件。
  • 高效标记cDNA。
在cDNA合成过程中纳入Cy3-、Cy5-、DIG-、生物素或氨基烯丙基标记的核苷酸。

组分

  • 转录组逆转录酶，在储存缓冲液中
  • 转录组RT缓冲液，5倍浓缩

质量

每批逆转录酶都在逆转录聚合酶链反应中进行常规功能测试：

  • 用传统的热循环仪检测来自人类肌营养不良蛋白基因的10kb片段，从人类骨骼肌总RNA开始
  • 用LightCycler®仪器检测5 x 102至5 x 106副本的体外-转录人群PBGD RNA。结果以固定交叉点和固定荧光强度来定义。

制备说明

体积活度：20 U/μl。
较长、罕见或困难的RNA靶的转录
逆转录酶推荐用于以下方面的RT-PCR：

  • 长靶，因为它可以转录高达14 kb的RNA模板
  • 罕见靶，因为它具有高度灵敏度
  • 富含GC的靶，因为它可以在高温（高达+65oC）条件下工作，以消除与大量二级结构相关的问题

许多应用的标记
转录组逆转录酶也被推荐用于制备标记的cDNA，因为它接受多种修饰的核苷酸（包括Cy3、Cy5、DIG、生物素或氨基烯丙基标记的dNTP）。
反应要求
转录者接受ssRNA和ssDNA模板，并要求转录引物。

储存及稳定性

避免反复冻融。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

法律信息

LightCycler is a registered trademark of Roche

储存分类代码

12 - Non Combustible Liquids

WGK

WGK 1

闪点(°F)

does not flash

闪点(°C)

does not flash

法规信息

常规特殊物品

分析证书(COA)

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Spitali P, et al.
Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle, 9, 715-726 (2018)
Identification of an active reverse transcriptase enzyme encoded by a human endogenous HERV-K retrovirus.
Berkhout B, et al.
Journal of Virology, 73(3), 2365-2375 (1999)
Valdimara C Vieira et al.
mBio, 5(6) (2014-12-30)
Several recent studies have converged upon the innate immune DNA cytosine deaminase APOBEC3B (A3B) as a significant source of genomic uracil lesions and mutagenesis in multiple human cancers, including those of the breast, head/neck, cervix, bladder, lung, ovary, and other
Pietro Spitali et al.
Journal of cachexia, sarcopenia and muscle, 9(4), 715-726 (2018-04-24)
Analysis of muscle biopsies allowed to characterize the pathophysiological changes of Duchenne and Becker muscular dystrophies (D/BMD) leading to the clinical phenotype. Muscle tissue is often investigated during interventional dose finding studies to show in situ proof of concept and
Expression profiles and function analysis of microRNAs in postovulatory aging mouse oocytes
Wang TY, et al.
Aging, 9, 1186-1186 (2017)
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