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生物来源
bacterial (Diplococcus pneumoniae)
质量水平
形式
solution
包装
pkg of 1,000 U (10742988001 [10 U/μl])
pkg of 200 U (10742970001 [10 U/μl])
制造商/商品名称
Roche
参数
37 °C optimum reaction temp.
储存温度
−20°C
一般描述
同裂酶
该酶是Bsp143 I、Dpn II、Mbo I、Nde II和Sau3A I的同裂酶。
甲基化敏感性
如果不存在6-甲基腺嘌呤，该酶仅在指定位点（*）处出现5-甲基胞嘧啶时发生抑制。
典型的连接和再切割检测
将通过完全消化1μg pBR322 DNA所获得的Dpn I片段在+4°C下与1U T4 DNA连接酶在10μl含有66mM Tris-HCl、5mM MgCl2、5mM二硫苏糖醇、1mM ATP、pH 7.5（在+ 20°C时）的缓冲液中连接16小时。可连接并随后用Dpn I重新切割的产物的百分比（产生pBR322×Dpn I片段的典型模式）已在检验报告的“Lig”和“Rec”下列出。
该酶是Bsp143 I、Dpn II、Mbo I、Nde II和Sau3A I的同裂酶。
甲基化敏感性
如果不存在6-甲基腺嘌呤，该酶仅在指定位点（*）处出现5-甲基胞嘧啶时发生抑制。
典型的连接和再切割检测
将通过完全消化1μg pBR322 DNA所获得的Dpn I片段在+4°C下与1U T4 DNA连接酶在10μl含有66mM Tris-HCl、5mM MgCl2、5mM二硫苏糖醇、1mM ATP、pH 7.5（在+ 20°C时）的缓冲液中连接16小时。可连接并随后用Dpn I重新切割的产物的百分比（产生pBR322×Dpn I片段的典型模式）已在检验报告的“Lig”和“Rec”下列出。
Dpn I需要依靠甲基化的腺嘌呤残基才能发挥活性，因此只能消化含N6-甲基腺嘌呤的GmATC序列。这样的甲基化序列来自dam甲基化酶的催化。这种对甲基化的要求可用来区分Dpn I、Mbo I和Sau3A I三种酶，其中，Mbo I受dam甲基化抑制，Sau3A I则不受dam甲基化影响。与Mbo I和Sau3A I相比，Dpn I还在识别序列上的不同位点切割。
特异性
识别位点：GmAT*C
GmAT*C
识别位点：GmA↓T*C
GmA↓T*C
热灭活：在65 °C孵育15分钟后Dpn I未失活。
GmAT*C
识别位点：GmA↓T*C
GmA↓T*C
热灭活：在65 °C孵育15分钟后Dpn I未失活。
应用
在PCR介导突变中，DpnI核酸酶已被用于PCR后的野生型DNA的消化。
质量
缺乏非特异性内切核酸酶活性
将1μg pBR322 DNA 与过量的Dpn I一起在50μl SuRE/Cut 缓冲液A中孵育16小时。检验报告(CoA）提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。
缺乏核酸外切酶活性
将大约5μg [3H]标记的小牛胸腺DNA与3μl Dpn I一起溶于总体积为100μl 50mM Tris-HCl溶液（含10 mM MgCl2、1mM二硫赤藓糖醇，pH约7.5）中,并在+ 37℃下孵育4小时。根据检验报告所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。
将1μg pBR322 DNA 与过量的Dpn I一起在50μl SuRE/Cut 缓冲液A中孵育16小时。检验报告(CoA）提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。
缺乏核酸外切酶活性
将大约5μg [3H]标记的小牛胸腺DNA与3μl Dpn I一起溶于总体积为100μl 50mM Tris-HCl溶液（含10 mM MgCl2、1mM二硫赤藓糖醇，pH约7.5）中,并在+ 37℃下孵育4小时。根据检验报告所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。
相容性
Dpn I可生成具有与任何钝端相容的钝端片段。
DNA图谱分析
不同DNA上的切割位点数量
- λ：116
- φX174: 0
- Ad2: 87
- M13mp7: 8
- pBR322: 22
- pBR328: 27
- pUC18: 15
- SV40: 8
单位定义
在+37°C，总体积为25 μl (1x) SuRE/Cut缓冲液A中，一个单位表示在1个小时内裂解1 μg pBR322 DNA的酶活性。由于pBR322 DNA的完全Dpn I消化需要完全甲基化的GATC序列，因此在活性测定过程中可能会观察到< 5%的部分消化条带。
分析说明
SuRE/Cut缓冲体系
建议使用粗体强调的缓冲液以获得最佳活性
建议使用粗体强调的缓冲液以获得最佳活性
- A: 100%
- B: 75-100%
- H: 75-100%
- L: 50-75%
- M: 75-100%
在PCR缓冲液中的活性：100%
在PCR混合液（Taq DNA聚合酶缓冲液）中的相对活性为100%。PCR混合液含有λDNA、引物、10mM Tris-HCl（pH 8.3，20℃）、50mM KCl、1.5mM MgCl2、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA聚合酶。该混合液可用于25个扩增循环。在Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合反应缓冲液中的活性为100%。Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液不在美国销售。
在PCR混合液（Taq DNA聚合酶缓冲液）中的相对活性为100%。PCR混合液含有λDNA、引物、10mM Tris-HCl（pH 8.3，20℃）、50mM KCl、1.5mM MgCl2、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA聚合酶。该混合液可用于25个扩增循环。在Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合反应缓冲液中的活性为100%。Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液不在美国销售。
其他说明
仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。
仅试剂盒组分
产品编号
说明
- Enzyme Solution
- SuRE/Cut Buffer A 10x concentrated
储存分类代码
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
闪点(°F)
does not flash
闪点(°C)
does not flash
法规信息
含少量动物源组分生物产品
常规特殊物品
Yoshiyuki Adachi et al.
Infection and immunity, 72(7), 4159-4171 (2004-06-24)
Dectin 1 is a mammalian cell surface receptor for (1-->3)-beta-d-glucans. Since (1-->3)-beta-d-glucans are commonly present on fungal cell walls, it has been suggested that dectin 1 is important for recognizing fungal invasion. In this study we tried to deduce the
商品
The term “Restriction enzyme” originated from the studies of Enterobacteria phage λ (lambda phage) in the laboratories of Werner Arber and Matthew Meselson.
术语“限制酶”源自Werner Arber和Matthew Meselson实验室对肠杆菌噬菌体λ（λ噬菌体）的研究。
相关内容
Restriction endonucleases in prokaryotes function primarily to protect against foreign genetic material, notably bacteriophage DNA.
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