哺乳动物血液 DNA 分离试剂盒

从全血中分离 DNA 可能很困难，因为血液是含有细胞、蛋白质、代谢物等的复杂混合物。大多数细胞 (> 99%) 是无细胞核的红细胞（红细胞），因此不具有 DNA。白细胞含有细胞核和 DNA。因此，血液中的 DNA 必须从三种白细胞（单核细胞、淋巴细胞或粒细胞）中分离。

样品材料：
人全血（用肝素钠、EDTA 或柠檬酸钠处理）：1 至 10 mL
分离淋巴细胞：1 至 10 mL
分离血沉棕黄层：10 至 20 mL 全血的血沉棕黄层，含有至少 1.0 x 107 个白细胞。

分离 DNA 的纯度：平均 A 260/A 280 比值：1.7-1.9

哺乳动物血液的 DNA 分离试剂盒可快速分离 1-10 mL 哺乳动物全血、淋巴细胞或血沉棕黄层样本中的 DNA。

哺乳动物血液DNA提取试剂盒已被用于从哮喘患者血液中分离基因组DNA，从而用于单核苷酸多态性基因分型。

哺乳动物血液的 DNA 分离试剂盒纯化适合大多数分子生物学应用的 DNA：

• PCR/长PCR
• 测序
• 限制性酶切
• DNA印迹
• 克隆

• 同时处理多个样本。

DNA 很容易在 90 分钟内纯化（加上 30 至 60 分钟的重悬时间）。

• 使用经济有效的试剂盒。

在大多数自制方法的成本下实现更快的 DNA 纯化。

• 获得一致和可靠的结果。

使用不同数量的白细胞分析不同的样本体积 (1-10 mL)。

• 提高安全性。

避免使用离液盐、有害有机溶剂和色谱柱纯化步骤。

对每批试剂盒进行功能检测，以确定其从人全血中纯化 DNA 的能力，随后使用扩增长模板 PCR 系统通过 PCR 特异性扩增 4.8 kb tPA 片段。通过琼脂糖凝胶电泳观察 4.8 kb tPA 产物，并与适当的阳性和阴性对照进行比较。可观察到与阳性对照品强度相当的单一 4.8 kb tPA 条带。还检测了试剂盒缓冲液中是否存在 dna 酶污染。将每种溶液与1μg BR322 DNA在+37°C温育6小时。然后通过琼脂糖凝胶电泳法显示 DNA，并与阳性对照进行比较，以确定是否存在可见的线性或缺口质粒 DNA。

哺乳动物血液程序的 DNA 分离试剂盒依赖于通过优先的红细胞溶解从全血中分离白细胞。在存在强阴离子洗涤剂的条件下，白细胞溶解，然后通过脱水和沉淀除去蛋白质。随后通过乙醇沉淀回收纯化 DNA。

图 1：用哺乳动物血液 DNA 分离试剂盒制备的哺乳动物血液大 DNA 片段的扩增。从两份研究样本中制备 DNA，一份含有 10 mL 人血，另一份含有 10 mL 小鼠血。每份 DNA 制备液的等份试样被用作扩增长模板 PCR 系统扩增多个基因片段的模板。PCR 产物进行凝胶电泳分析。
左面板：从人类样本中扩增出的基因片段
泳道 2、3：从 25 ng DNA 扩增的 tPA 片段 (9.3 kb)
泳道 4、5：从 50 ng DNA 扩增出 tPA 片段 (15 kb)
泳道 6、7：从 100 ng DNA 扩增的β-珠蛋白片段 (23 kb)
泳道 8、9：从 200 ng DNA 扩增的β-珠蛋白片段 (28 kb)
泳道 1、10：DNA 分子量标记物 III
右面板：从小鼠样本中扩增出的基因片段
泳道 2、3：从 330 ng DNA 扩增的 IL-2 基因 (4.2 kb)
泳道 4、5：α-2 从 100 ng DNA 扩增的胶原片段 (5.6 kb)
泳道 6、7：α-2 从 50 ng DNA 扩增的胶原片段 (10.4 kb)
泳道 8、9：α-2 从 100 ng DNA 扩增的胶原片段 (15.4 kb)
泳道 1、10：DNA 分子量标记物 III

图 2：用哺乳动物血 DNA 分离试剂盒制备的各种人血样 DNA 的DNA印迹分析。DNA 是从几个研究样本中制备的，包括含有不同抗凝剂的人血以及淋巴细胞和血沉棕黄层制剂。用 Eco RI 消化各制备液 10μg，通过凝胶电泳分离，并通过DNA印迹法转移至尼龙膜上。用 DIG 标记的 n-ras 探针检测各样本中 n-ras 基因。
泳道 2、3：含柠檬酸钠的血样
泳道 4、5：含肝素的血样
泳道 6、7：含 EDTA 钠的血样
泳道 8、9：血沉棕黄层制备
泳道 10、11：淋巴细胞制备
泳道 1、12：DNA 分子量标记物 VII
结果：每个泳道仅包含预期大小的单一杂交条带。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。