推荐产品
形式
solution
质量水平
用途
sufficient for 40 labeling reactions
包装
pkg of 160 μL
制造商/商品名称
Roche
环保替代产品特性
Designing Safer Chemicals
Learn more about the Principles of Green Chemistry.
sustainability
Greener Alternative Product
环保替代产品分类
储存温度
−20°C
一般描述
DIG-High Prime是酶和核苷酸的混合物，用于用地高辛-11-dUTP 快速标记随机引物DNA。在此方法中，将随机寡核苷酸的3′-OH末端作为引物，由Klenow聚合酶合成变性DNA的互补DNA链。经一小时孵育或过夜孵育后，得到高产量的DIG 标记探针。
我们致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品设计为更安全的化学品。 DIG系统是灵敏且具有成本效益的方案，可替代放射性标记和放射法检测核酸。有许多已发表论文证明DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交DNA的唯一选择。
特异性
热灭活：通过加入 2 μl 0.2 M EDTA（pH8.0）和/或加热至 65℃ 10 分钟来终止反应。
应用
DIG-High Primer标记DNA探针用于多种杂交技术：
- Southern 印迹
- Northern 印迹
- 斑点/狭缝印迹
- 筛选基因文库
- 原位杂交
特点和优势
DIG-High Prime 保证有效标记：
标记效率：
用 1μg 模板进行的标准标记反应在 1 小时后产生 0.8μg 新合成的洋地黄毒苷标记的 DNA，在 + 37℃ 温育 20 小时后产生 2μg。
内容
5x 浓缩的随机引物混合物：1U/ μl Klenow 聚合酶，标记级，1mM dATP，1mM dCTP，1mM dGTP，0.65mM dTTP，0.35mM DIG-11-dUTP，在 50％（v/v）甘油中碱不稳定。
- 标准反应中 DNA 含量范围为 10ng 至 3μg。
- 不同长度的 DNA，从小的限制性片段到 λ 或粘粒 DNA。
- DNA，超螺旋或线性化。
- 低熔点琼脂糖中的 DNA。
标记效率：
用 1μg 模板进行的标准标记反应在 1 小时后产生 0.8μg 新合成的洋地黄毒苷标记的 DNA，在 + 37℃ 温育 20 小时后产生 2μg。
内容
5x 浓缩的随机引物混合物：1U/ μl Klenow 聚合酶，标记级，1mM dATP，1mM dCTP，1mM dGTP，0.65mM dTTP，0.35mM DIG-11-dUTP，在 50％（v/v）甘油中碱不稳定。
质量
功能测试：
在 1μg 线性化 pBR 328 的标准测定中，1 小时后合成 0.8μg DIG 标记的 DNA，20 小时后合成 2.3μg。当该标记的 DNA 用于以 20ng/ml 的浓度杂交时，通过化学发光，用抗 DIG-碱性磷酸酶缀合物和 CSPD 在斑点印迹或 Southern 印迹上检测 0.03pg 同源 DNA。
在 1μg 线性化 pBR 328 的标准测定中，1 小时后合成 0.8μg DIG 标记的 DNA，20 小时后合成 2.3μg。当该标记的 DNA 用于以 20ng/ml 的浓度杂交时，通过化学发光，用抗 DIG-碱性磷酸酶缀合物和 CSPD 在斑点印迹或 Southern 印迹上检测 0.03pg 同源 DNA。
原理
根据随机引物标记技术，用 DIG-High Prime 产生 DIG 标记的 DNA 探针。DIG-High Prime 是一种专门开发的反应混合物，含有地高辛-11-dUTP 和随机引物标记所需的所有试剂，包括 Klenow 酶，在优化的 5x 浓缩反应缓冲液（在 50% 甘油中）中预混合。
制备说明
反应混合物或杂交缓冲液中的 DIG 标记的探针在 -15 至 -25℃ 下可稳定储存超过 12 个月。如果在使用前新鲜变性，它们可以重复使用几次。
检测时间：80 分钟
样品材料
注意：为了获得最佳结果，模板 DNA 应该线性化，并且片段长度为 100bp，或更长。如果 DNA 模板 >5kb，在标记前使用 4bp 切口的限制性内切酶进行限制性消化。
检测时间：80 分钟
样品材料
- 至少 100bp 的 DNA 片段
- 线性化质粒，粘粒或 λDNA
- 超螺旋 DNA
- 或最小量的 DNA（10ng），例如从凝胶或熔融琼脂糖中分离的 DNA 限制片段
注意：为了获得最佳结果，模板 DNA 应该线性化，并且片段长度为 100bp，或更长。如果 DNA 模板 >5kb，在标记前使用 4bp 切口的限制性内切酶进行限制性消化。
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
WGK
WGK 1
闪点(°F)
No data available
闪点(°C)
No data available
法规信息
常规特殊物品
含少量动物源组分生物产品
Light regulation of asexual development in the rice blast fungus, Magnaporthe oryzae
<BIG>Lee K, et al.</BIG>
Fungal genetics and biology : FG & B, 43 (2006)
Characterization of the Chromosomal Transmission of Intergeneric Hybrids of spp. and by Genomic in situ Hybridization.
Wang X
Crop Science, 50, 1642-1648 (2010)
商品
Digoxigenin (DIG) labeling methods and kits for DNA and RNA DIG probes, random primed DNA labeling, nick translation labeling, 5’ and 3’ oligonucleotide end-labeling.
地高辛（DIG）标记方法和试剂盒适用于DNA和RNA DIG探针、随机引物DNA标记、切口平移标记、5'和3'寡核苷酸末端标记。
我们的科学家团队拥有各种研究领域经验，包括生命科学、材料科学、化学合成、色谱、分析及许多其他领域.
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