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用途
sufficient for 30 reactions (including 5 control reactions)
质量水平
比活
>50 units/μg protein
特点
dNTPs included
hotstart: no
包装
kit of 1 (10 components)
制造商/商品名称
Roche
参数
42 °C optimum reaction temp.
技术
RT-PCR: suitable
输入
purified RNA
储存温度
−20°C
一般描述
使用AMV RT进行第一链cDNA合成具有一定优势。与M-MuLV RT相比，AMV RT具有更高的热稳定性，与在+ 37°C进行的反应相比，在+ 42°C下进行的反应，具有更高的特异性和更好的二级结构解析度。
扩增RNA需要将RNA底物转化为DNA。这一过程可以通过使用逆转录酶实现，例如使用AMV RT（禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶）或M-MuLV RT（莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶）。所得cDNA可用作标准PCR模板。
AMV RT在一个或多个位点合成新的cDNA链，而位点由所用引物的类型决定：
AMV RT在一个或多个位点合成新的cDNA链，而位点由所用引物的类型决定：
- 如使用Oligo-p(dT)15用作引物，则位点在聚(A)mRNA的3′端
- 如使用随机引物p（dN）6，则位点在沿着mRNA模板的非特异性点处，或
- 在由序列特异性引物确定的位点处。
第一链cDNA合成试剂盒以两步RT PCR用作起始反应，合成第一链cDNA。本试剂盒包含用于第一链合成的逆转录酶AMV、两种不同引物、PCR核苷酸混合物和对照 Neo pa RNA。可以使用标准程序克隆RT-PCR生成的PCR产物。
特异性
热灭活：在95℃处理5min
逆转录酶AMV
逆转录酶AMV
应用
用于RT-PCR（AMV）的第一链cDNA合成试剂盒适用于：
- 检测是否存在RNA病毒或其他含RNA的微生物（与PCR结合使用）
- 定量mRNA，监测特定mRNA的差异表达
- “差异显示mRNA”的第一步
- 生成cDNA文库，具有大范围和全长插入片段
- 逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR），将RNA逆转录成互补DNA
特点和优势
稳健性：
可使用序列特异性引物、聚（dT）15引物或随机引物p（dN）6
- 转录总RNA、mRNA和病毒RNA以及难以转录的二级RNA结构
- 获得最大12 kb的cDNA转录物
- 与M-MuLV逆转录酶相比，热稳定性（最高50°C）和特异性更好
- 无需在PCR反应之前纯化所得cDNA
可使用序列特异性引物、聚（dT）15引物或随机引物p（dN）6
包装
1个试剂盒包含10种组分。
质量
在标准的cDNA合成分析中，使用1.0 μg Neo pa RNA模板与20 μ Ci [α-32P]-dCTP（特异活性为3000 Ci/mmol）在+42°C下共孵育60分钟后，至少制备出300 ng cDNA（即30%的得率）。
单位定义
体积活性：20 到 25 U/μl
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
仅试剂盒组分
产品编号
说明
- Reverse Transcriptase AMV
- PCR Nucleotide Mix, pH 8.5 10 mM each
- Reaction Buffer
- MgCl2 Stock Solution 25 mM
- Gelatin 0.05% (w/v)
- Oligo-p(dT)15 , 0.02 A260 units/μl 0.8 μg/μl
- Random Primer p(dN)6 , 0.04 A260 units/μl 1.6 μg/μl
- RNase Inhibitor 50 U/μl
- Control Neo pa RNA (1.0 kb in length with additional 19-base 3′-poly(A) tail) 0.2 μg/μl
- Water, PCR Grade
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WGK
WGK 1
闪点(°F)
does not flash
闪点(°C)
does not flash
法规信息
含少量动物源组分生物产品
常规特殊物品
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商品
Identify causes and remedies for SDS-PAGE sample preparation challenges and optimize electrophoresis conditions.
实验方案
First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV).
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