产品名称
Tth DNA聚合酶, pkg of 500 U (2 x 250_U), sufficient for ≤200 reactions
biological source
bacterial (Thermus thermophilus)
recombinant
expressed in E. coli
form
liquid
usage
sufficient for ≤200 reactions
specific activity
5 U/μL
packaging
pkg of 500 U (2 x 250_U)
manufacturer/tradename
Roche
concentration
0.5-5.0 units (per reaction for PCR (standard))
2.5 units (per reaction for PCR (standard))
parameter
75 °C optimum reaction temp.
technique(s)
PCR: suitable
RT-PCR: suitable
nucleic acid labeling: suitable
color
colorless
optimum pH
~9.0 (25 °C)
solubility
water: miscible
suitability
suitable for molecular biology
UniProt accession no.
application(s)
life science and biopharma
foreign activity
Endonuclease, none detected (up to 20 enzyme units using Lambda-DNA/ 16h/37°C)
Nicking activity, none detected ( up to 20 enzyme units using pBR322-DNA / 16h/37°C)
RNases, none detected (up to 20 enzyme units using MS II-RNA; 4h/37°C)
storage temp.
−20°C
Quality Level
Analysis Note
每一批次的Tth DNA聚合酶均在活化的DNA上进行了活性分析。我们使用λDNA和人类基因组DNA进行功能测试。使用小鼠全RNA和β-actin的特异性引物开展RT/PCR分析。针对每一批次的Tth DNA聚合酶，我们均按照当前质控流程进行检验，确保其中不存在外切核酸酶和内切核酸酶活性，以及具有切割活性的污染物。依照当前的质控流程，我们还采用了一套独特的自启动检测来确保产品中不存在DNA污染。
Application
嗜热菌（Thermus thermophilus）（Tth）DNA聚合酶能用于：
- 通过聚合酶链反应（PCR）扩增DNA片段，由于其在高温（95°C）长时间培育依然保持活性
- 放射性标记核苷酸、地高辛或生物素标记的DNA片段，由于其能将修饰的脱氧核糖核苷酸用作底物
- 有效地将靶标RNA转录为cDNA，由于其内在的Mn依赖性逆转录酶（RT）活性
- 用于实时PCR
Biochem/physiol Actions
嗜热菌（Thermus thermophilus）（Tth） DNA聚合酶是一种具有热稳定性的DNA聚合酶，有逆向转录酶活性。此酶是高度进行性的5′-3′DNA聚合酶，缺乏3′-5′核酸外切酶活性（校对）。 内在的逆向转录酶（RT）活性在镁离子存在的条件下，转录效率高远高于大肠杆菌DNA聚合酶I和Taq DNA聚合酶的转录效率。RT 活性和核酸酶H活性无关。Tth DNA聚合酶在较高的温度范围（最佳范围+55℃到+70℃，最高温度+95℃）依然有活性，克服了RNA二级结构问题。生成的cDNA在Mg2+存在的情况下，可通过相同的酶进行PCR扩增。Tth DNA聚合酶能够在较高的温度范围进行逆向转录和DNA扩增，因此可用于对细胞和病毒RNA进行定量RT-PCR、克隆和基因表达分析。Tth DNA聚合酶可用于最多1kbRNA RT-PCR扩增。
Features and Benefits
Tth DNA聚合酶：
- 确保优化聚合酶链反应（PCR）得到的产品大小在RT-PCR反应中至少达到1,000 bp
- 可将修饰的脱氧核糖核苷三磷酸用作底物
- 与核酸酶 H活性无关
- 具有高温热稳定性可以克服该问题，高温热稳定性通常与RNA中存在的高级二级结构有关
General description
Tth DNA聚合酶是从嗜热真细菌Thermus thermophilusHB8中分离出来，纯化后没有非特异性脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶。这种酶是一种进行性5′-3′DNA聚合酶，没有3′-5′核酸外切酶活性。该酶在大约pH9（+25℃调整），温度+75℃时活性最高。它在高温（95℃）延长反应中依然保持活性。
Legal Information
本产品的使用受到美国专利及其对应的境外专利声明保护。购买本产品，即相当于依照境外的专利声明获得了一份受限制、不可转让的使用许可，即将此等数量的产品仅用于购买者′内部的研究用途。不享受任何其他专利权利。无权进行任何商业活动，包括无批准报告购买者使用结果，免费使用等。不能给出任何商业暗示。禁止反言。本产品仅适合于研究用途。如需用于Roche专利许可的诊断用途，需要获得一份独立的Roche许可。有关购买许可的更多信息，可联系Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA获取。
Other Notes
一单位Tth DNA聚合酶的定义为，在+70 °C下，在30分钟时间内将10 nmol总dNTP催化整合为酸性可沉淀DNA所需的酶量，这一检测条件在“单位检测”中有具体说明。
单位检测：孵育缓冲液，用于分析活化的DNA
67 mM Tris-HCI, pH 8.8 (+25 °C)， 16.6 mM (NH4)2SO4，6.7 mM MgCl2，10 mM 2-巯基乙酸，dATP，dCTP，dGTP，dTTP 每种0.2mM。
孵育步骤
在+70 °C下，将12.5 μg 激活的鲱鱼精子DNA和0.1 μ Ci [α32P] dCTP与0.01至0.1 个单位的Tth DNA聚合酶在50 μl孵育缓冲液中共同孵育（有石蜡油保护）30分钟。
随后通过三氟乙酸沉淀法和闪烁计数来确定整合的dNTP量。
体积活性：单一PCR（经优化）反应需0.5至5 U
单次PCR（标准）反应需2.5 U
激活DNA分析的测定结果在“单位检测”部分中进行描述。
单位检测：孵育缓冲液，用于分析活化的DNA
67 mM Tris-HCI, pH 8.8 (+25 °C)， 16.6 mM (NH4)2SO4，6.7 mM MgCl2，10 mM 2-巯基乙酸，dATP，dCTP，dGTP，dTTP 每种0.2mM。
孵育步骤
在+70 °C下，将12.5 μg 激活的鲱鱼精子DNA和0.1 μ Ci [α32P] dCTP与0.01至0.1 个单位的Tth DNA聚合酶在50 μl孵育缓冲液中共同孵育（有石蜡油保护）30分钟。
随后通过三氟乙酸沉淀法和闪烁计数来确定整合的dNTP量。
体积活性：单一PCR（经优化）反应需0.5至5 U
单次PCR（标准）反应需2.5 U
激活DNA分析的测定结果在“单位检测”部分中进行描述。
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
Packaging
1个试剂盒包含3个组分
存储类别
12 - Non Combustible Liquids
wgk
WGK 1
flash_point_f
does not flash
flash_point_c
does not flash
法规信息
含少量动物源组分生物产品
常规特殊物品
此项目有
Ghosal S, et al.
Fundamentals of Analytical Toxicology (2018)
Petra Wolffs et al.
Journal of clinical microbiology, 42(1), 408-411 (2004-01-13)
An investigation of the influence of five DNA polymerase-buffer systems on real-time PCR showed that the choice of both DNA polymerase and the buffer system affected the amplification efficiency as well as the detection window. The analytical repeatability of the
Taq and Other Thermostable DNA Polymerases
van Pelt-Verkuil E, et al
Principles and Technical Aspects of PCR Amplification, 103-118 (2008)
S A Bustin
Journal of molecular endocrinology, 25(2), 169-193 (2000-10-03)
The reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) is the most sensitive method for the detection of low-abundance mRNA, often obtained from limited tissue samples. However, it is a complex technique, there are substantial problems associated with its true sensitivity, reproducibility
T W Myers et al.
Biochemistry, 30(31), 7661-7666 (1991-08-06)
A recombinant DNA polymerase derived from the thermophilic eubacterium Thermus thermophilus (Tth pol) was found to possess very efficient reverse transcriptase (RT) activity in the presence of MnCl2. Many of the problems typically associated with the high degree of secondary
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