逆转录酶检测，比色法

逆转录酶检测法设计用于定量测定细胞培养物和其他生物样品中的RT活性。该检测方法可用于确定逆转录病毒在培养中的哺乳动物细胞（经逆转录病毒感染的）中的增殖。该检测也可用于RT抑制剂的体外筛选。

逆转录酶检测，比色法，利用逆转录酶合成DNA的能力[使用杂合poly（A）x oligo（dT）15作为模板和引物]。其可避免使用标准RT测定中所使用的[3H]-或[32P]-标记的核苷酸。代替放射性标记的核苷酸，以优化的比例将地高辛和生物素标记的核苷酸通过RT活性掺入相同的DNA分子中。试剂盒中提供有模板/引物杂交体，但是由于检测的灵活性，其允许使用自选的模板（例如病毒模板）。以合成的DNA作为RT活性参数，根据夹心ELISA实验方案对DNA进行检测和定量：生物素标记的DNA结合至链霉亲和素包被的微孔板模块的表面。在下一步中，加入与过氧化物酶缀合的地高辛抗体（抗-DIG-POD），并与地高辛标记的核苷酸进行结合（经Institute Pasteur许可）。最后，加入过氧化物酶底物ABTS。过氧化物酶可催化底物的裂解以产生有色反应产物。使用微孔板（ELISA）读数器对样品的吸光度进行测定，其与样品中的RT活性水平直接相关。

该检测方法可检测天然或重组逆转录病毒的逆转录酶活性，包括HIV-1、HIV-2、SIV-1、AMV和M-MulV的活性。

逆转录酶(RT)活性的测定已广泛应用于逆转录病毒繁殖的体外测试。早期原病毒DNA的合成需要RT，因此其是抗逆转录病毒治疗的主要靶标（例如在获得性免疫缺陷综合症(AIDS)中）。逆转录酶通常使用与各种引物复合的RNA作为DNA合成的模板。为了检测或定量RT活性，传统上通常对掺入的放射性标记核苷酸进行定量。
检测时间：大约4小时（对于1小时的酶反应来说），大约18小时（对于15小时的酶反应来说）。
样品材料：细胞培养上清液和其他生物样品、RT抑制剂。
灵敏度：逆转录酶检测可在1小时反应中检测到20pg HIV-1逆转录酶。可以在过夜反应中检测到1pg。

比色酶免疫测定法，可用于通过将地高辛和生物素标记的dUTP掺入DNA中来定量测定逆转录病毒的逆转录酶活性。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

1个试剂盒包含14种组分。