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一般描述
从游离 FFPE 组织切片中分离低至中等通量的微量总 RNA。
应用
高纯 FFPE RNA Micro 试剂盒从福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 的组织样本中分离出总 RNA，直接用于：
- 定性 RT-PCR
- mRNA 的相对定量与实时 PCR 系统，如 LightCycler ® 480 系统
- 差异显示 RT-PCR
- cDNA 合成
- 引物延伸
特点和优势
在离液盐（盐酸胍）存在下，核酸结合到玻璃纤维织物的表面。这使得高纯度过滤器管能够在核酸（DNA 和 RNA）清除污染物的同时特异性地固定它们。对于 RNA 分离，可以优化结合条件以确保固定所有的 RNA。
大小分布 ：从福尔马林固定的组织中分离得到的 RNA 典型大小为 150～1500 个碱基。然而，切片厚度、组织类型、样本年龄和使用的固定方案会影响分离 RNA 的产量和质量。
容量 ：高纯度的微量过滤管可容纳 500μl 样品体积。
样品材料 ：1-10μm 福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 的组织切片（例如，来自哺乳动物物种的结肠、乳腺、肝脏、肾脏、脾脏）。
大小分布 ：从福尔马林固定的组织中分离得到的 RNA 典型大小为 150～1500 个碱基。然而，切片厚度、组织类型、样本年龄和使用的固定方案会影响分离 RNA 的产量和质量。
容量 ：高纯度的微量过滤管可容纳 500μl 样品体积。
样品材料 ：1-10μm 福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 的组织切片（例如，来自哺乳动物物种的结肠、乳腺、肝脏、肾脏、脾脏）。
高纯 FFPE RNA Micro 试剂盒从福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 的组织样本中分离总 RNA，直接用于 RT-PCR。
- 简化 FFPE 组织中的 RNA 分离 （甚至是小的 RNA 片段）。
- 获得高浓度、即用型洗脱液 和极佳的 RNA 回收率 ( 80%)。
- 分离无 DNA RNA ，用于定性和定量 RT-PCR。
- 用一个试剂盒去除污染物将核糖核酸损失降至最低，无需沉淀或其他降解核糖核酸的处理步骤。
- 生成高质量模板 RNA，在 RT-PCR 中表现出优异的性能和线性。
组分
- 组织裂解缓冲液
- 蛋白酶 K，重组，PCR 级
- 结合缓冲液
- 洗涤缓冲液 I
- 洗涤缓冲液 II
- DNase I，重组，冻干
- DNase 孵育缓冲液
- 洗脱缓冲液
- 高纯微量过滤管
- 收集管
质量
将福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片通过过夜蛋白酶 K 消化进行匀浆，并按照描述进行纯化。通过测量 260 nm 处的光密度确定 RNA 产量。
一步法 RT-PCR 使用 β2M 基因的 RNA 洗脱液和特异性引物。在 LightCycler ® 2.0 仪器上的以下 PCR 中（使用 LightCycler ® RNA Amplification Kit SYBR Green I 和针对 β2M），在 Cp 值小于 24 时获得预期扩增信号。
在无逆转录酶步骤的 LightCycler ® 2.0 仪器上通过 PCR 检查是否存在污染性基因组 DNA；未获得扩增产物。
一步法 RT-PCR 使用 β2M 基因的 RNA 洗脱液和特异性引物。在 LightCycler ® 2.0 仪器上的以下 PCR 中（使用 LightCycler ® RNA Amplification Kit SYBR Green I 和针对 β2M），在 Cp 值小于 24 时获得预期扩增信号。
在无逆转录酶步骤的 LightCycler ® 2.0 仪器上通过 PCR 检查是否存在污染性基因组 DNA；未获得扩增产物。
制备说明
要制备 RNA 分离的组织切片，必须去除样本中的固定试剂；脱蜡后的切片即可用 High Pure FFPE RNA Micro Kit 进行处理。在用蛋白酶 K 和离液盐（盐酸胍）孵育期间，破坏并均质化脱蜡组织样本。然后将匀浆应用于高纯微量过滤管中的玻璃纤维羊毛上。
在程序中使用的缓冲条件下，所有核酸均与玻璃纤维羊毛特异性结合，而污染物质（盐、蛋白质和其他组织污染物）则不会。用 DNase I 直接在过滤器上消化制备液中的 DNA。简单的洗涤和离心步骤可轻易去除消化的 DNA 片段和其他污染物质。剩余的纯化 RNA 然后在小体积的低盐缓冲液中洗脱。
在程序中使用的缓冲条件下，所有核酸均与玻璃纤维羊毛特异性结合，而污染物质（盐、蛋白质和其他组织污染物）则不会。用 DNase I 直接在过滤器上消化制备液中的 DNA。简单的洗涤和离心步骤可轻易去除消化的 DNA 片段和其他污染物质。剩余的纯化 RNA 然后在小体积的低盐缓冲液中洗脱。
分析说明
典型 RNA 回收率
起始物料及用量： 1-10μm FFPE 切片，哺乳动物种属的结肠、乳腺、肝脏、肾脏、脾脏
收率/回收率：1.5-3.5 μg/5 μm 切片
所需时间： 60 min，未孵育 3 小时
反应数量： 50/1-10μm 切片
起始物料及用量： 1-10μm FFPE 切片，哺乳动物种属的结肠、乳腺、肝脏、肾脏、脾脏
收率/回收率：1.5-3.5 μg/5 μm 切片
所需时间： 60 min，未孵育 3 小时
反应数量： 50/1-10μm 切片
法律信息
LightCycler is a registered trademark of Roche
警示用语：
Danger
危险分类
Acute Tox. 4 Dermal - Acute Tox. 4 Inhalation - Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Resp. Sens. 1 - Skin Corr. 1C - Skin Sens. 1 - STOT SE 3
靶器官
Respiratory system
补充剂危害
储存分类代码
13 - Non Combustible Solids
WGK
WGK 2
闪点(°F)
does not flash
闪点(°C)
does not flash
法规信息
常规特殊物品
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