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物料
high-density polyethylene cap
polystyrene flask
质量水平
无菌性
sterile; γ-irradiated
特点
5 layer
包装
pack of 8
制造商/商品名称
Millicell®
参数
45 °C max. temp.
技术
cell culture | mammalian: suitable
高度
51 mm , excluding cap
74 mm , including cap
长度
22.2 cm
宽度
12 cm
表面积
1000 cm2
工作体积
200-300 mL
吸附类型
Tissue Culture (TC)-treated surface
运输
ambient
制备说明
- 要进行细胞播种，在Millicell HY T-1000烧瓶中加入所需的生长培养基。
- 添加所需数量的细胞以达到典型的播种密度。
- 将细胞和培养基混合，抬起烧瓶的末端，上下移液几次，直到达到均匀的悬浮。注意：未能充分将细胞混合到均匀的悬浮液中可能导致细胞在Millicell HY烧瓶各层之间分布不均匀。
- 将烧瓶侧放，使液体体积在各层烧瓶中均匀平衡。
- 倾斜烧瓶的末端，以划分每层烧瓶的液体体积。
- 放下烧瓶，使细胞悬浮液均匀地散布在每一层的整个表面。
- 根据体积的不同，可能需要摇动烧瓶的所有四个角，以确保整个表面湿润。注意：如果在润湿过程中任何一层的液体体积发生变化(例如，液体从顶层溢出到下层)，重复步骤4–6以确保液体在所有层之间均匀分布。
- 当运输到培养箱时，将烧瓶放回垂直位置。将烧瓶平放于培养箱中（如第6步），在适当的条件下培养细胞。
- 如果需要交换培养基，从Millicell HY T-1000烧瓶中抽吸或倒出培养基。注意：由于Millicell烧瓶的表面积较大，每次抽吸后可能需要让烧瓶侧立几分钟，以便所有残留液体汇集到一个共同的点，以便第二次抽吸完全除去剩余液体。
- 加入适量的新鲜培养基，重复第4–8步。
- 要收获细胞，按第9步所述移除培养基。
- 向烧瓶中加入所需量的适当洗涤溶液（例如，PBS或0.02% EDTA），重复第4–7步。
- 按照第9步除去洗涤液。
- 根据首选方案添加所需量的解离酶（例如，0.25%胰蛋白酶/EDTA或等效物），重复第4–8步，并孵育。每cm2所需的解离酶体积不需要从T型烧瓶方案变化。注意：在显微镜下观察，确保所有细胞与烧瓶表面完全分离。不能使细胞与培养表面完全分离（使所有细胞自由漂浮）可能导致细胞产量降低。
- 如果使用胰蛋白酶，加入所需体积的灭活溶液，如含血清的培养基。
- 如第9步所述，通过吸气或倒吸方法收集细胞。
法律信息
Millicell is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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