抗-蛋白酶3/PR3抗体，克隆MCPR3-2

成髓细胞蛋白酶（EC 3.4.21.76；UniProt P24158；也称为AGP7、C-ANCA抗原、白细胞蛋白酶3、中性粒细胞蛋白酶4、NP-4、P29、PR-3、PR3，韦格纳自身抗原）由人类中的PRTN3（也称为CANCA、MBN、NP4）基因（基因ID 5657）编码。蛋白酶3（PR3）是四种中性丝氨酸蛋白酶（弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、PR3和中性粒细胞丝氨酸蛋白酶4）之一，作为完全加工的成熟酶存储在人类中性粒细胞的嗜酸性粒细胞颗粒中。一些PR3分子不是在合成后靶向颗粒，而是以原形式或成熟形式最终出现在嗜中性粒细胞质膜的表面。这种表面表达的程度是由遗传决定的，但是中性粒细胞引发和激活后，中性粒细胞周围PR3的表面暴露和细胞周围活性可以进一步上调。PR3自身抗体（抗中性粒细胞胞质抗体或ANCA）是患有肉芽肿合并多血管炎（GPA；以前称为韦格纳肉芽肿）的患者的主要致病特征。已显示ANCA通过交联表面暴露的PR3和Fcγ受体在体外激活细胞因子引发的中性粒细胞。PR3活性和/或其被α1-抗胰蛋白酶/α-1蛋白酶抑制剂（α1PI）失活在人群中有所不同，并且在发作、复发或全身进展期间增加了GPA表现的风险。PR3产生时带有一个信号肽序列（a.a.1-25）、一个N末端和C末端前肽序列（分别为a.a.26-27和249-256），其去除产生成熟酶（a.a.28-248）。

克隆MCPR3-2检测到野生型PR3和催化失活的S176A PR3突变体，但未检测到中性粒细胞弹性蛋白酶或组织蛋白酶G。克隆MCPR3-2不干扰PR3酶活性或其与α1-蛋白酶抑制剂/α1-PI的相互作用（Sun，J.，et al.（1998）.J. Immunol. Methods.211（1-2）:111-123）。在基于ELISA的血清PR3自身抗体(ANCA)测量中，用PR3复合克隆MCPR3-2获得的OD读数与用PR3复合克隆MCPR3-3（目录号MABF973）获得的相应OD的比率与患者血清样品中ANCA的中和活性密切相关（Silva，F.，et al.（2010）.J. Autoimmun.35（4）299-308）。

表位：“底物结合口袋的东北方”，并与克隆MCPR3-3表位相邻（Silva，F.，et al.（2010）.J. Autoimmun.35（4）299-308）。

表达转染的人中性粒细胞PR3的HMC-1/PR3肥大细胞的颗粒提取物（Sun，J.，et al.（1998）.J. Immunol. Methods.211（1-2）:111-123）。

抗蛋白酶3/PR3抗体，克隆MCPR3-2是针对PR3的抗体，用于亲和结合测定、ELISA、流式细胞术和蛋白质印迹。

研究子类别
炎症 & 自身免疫机制

研究类别
细胞结构

蛋白质印迹分析：在非还原和还原条件下，2 µg/mL的代表性批次检测5 µg纯化人中性粒细胞PR3（由Amber Hummel，Mayo Clinic，Rochester，MN提供）。
流式细胞术分析：一个代表性批次检测到大量具有表面PR3的人外周血中性粒细胞。在TNFa刺激后，整个细胞群均呈阳性染色（Hinkofer，L.C.，et al.（2013）.J. Biol. Chem. 288（37）:26635-26648）。
流式细胞术分析：通过基于微珠的竞争结合测定的FACS分析确定，一个代表性批次通过不同于克隆MCPR3-3和MCPR3-7（目录号分别为MABF973和MABT403）识别的表位的独特表位结合固定化重组人PR3（Silva，F.，et al.（2010）.J. Autoimmun.35（4）299-308）。
流式细胞术分析：通过FACS分析确定，一个代表性批次结合了重组人PR3-包被的Talon珠，但未结合鼠PR3-包被的Talon珠。（Silva，F.，et al.（2010）.J. Autoimmun.35（4）299-308）。
ELISA分析：将代表性批次固定在孔表面上，并用于捕获纯化的人多形核细胞PR3或重组人PR3 S176A突变体，然后通过捕获的PR3从患者血清样品中亲和下拉PR3自身抗体（抗中性粒细胞胞质抗体或ANCA），随后通过碱性磷酸酶偶联的山羊抗人IgG检测结合的ANCA（Silva，F.，et al.（2010）.J. Autoimmun.35(4) 299-308; Sun, J., et al. (1998).J. Immunol. Methods.211（1-2）:111-123）。
蛋白质印迹分析：一个代表性批次在来自转染的HMC-1人肥大细胞的裂解物中以及来自人多形核细胞的纯化的PR3中检测到外源表达的S176A突变体PR3（Sun，J.，et al.（1998）.J. Immunol. Methods.211（1-2）:111-123）。
亲和结合检测：一个代表性批次捕获了采用pro-PR3构象的重组人PR3构建体proP-PR3ctp和采用具有相似亲和力的成熟PR3构象的重组构建体ΔPR3ctp-S195A（Hinkofer, L.C., et al.（2013）.J. Biol. Chem. 288（37）:26635-26648）。

通过亚型检测进行鉴别确认。

亚型分析：通过亚型检测确认该单克隆抗体的鉴别为IgG1κ。

观测分子量〜29 kDa。计算分子量27.81 kDa（Pro-PR3；a.a.1-256）、25.14 kDa（N末端信号和前肽被去除；a.a.28-256）、24.25 kDa（成熟；a.a.28-248）。

形式：纯化

纯化的小鼠单克隆IgG1κ抗体，溶于含0.1 M Tris-甘氨酸（pH 7.4）、150 mM NaCl和0.05%叠氮化钠的缓冲液中。

纯化蛋白G

自接收之日起，在2-8°C下可稳定保存1年。

浓度：请参考特定批次的数据表。

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