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Merck
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文件

MABE1095

Sigma-Aldrich

抗-DNA-RNA杂交抗体,克隆S9.6

clone S9.6, from mouse

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别名:
DNA-RNA Duplex, DNA/RNA Duplex, DNA:RNA Duplex, DNA-RNA Hybrid, DNA/RNA Hybrid, DNA:RNA Hybrid, RNA-DNA Duplex, RNA/DNA Duplex, RNA:DNA Duplex, RNA-DNA Hybrid, RNA/DNA Hybrid, RNA:DNA Hybrid
UNSPSC代码:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41

生物来源

mouse

质量水平

抗体形式

purified immunoglobulin

抗体产品类型

primary antibodies

克隆

S9.6, monoclonal

种属反应性(根据同源性预测)

all

技术

ChIP: suitable
affinity binding assay: suitable
dot blot: suitable
immunocytochemistry: suitable
immunoprecipitation (IP): suitable

同位素/亚型

IgG2aκ

运输

ambient

靶向翻译后修饰

unmodified

一般描述

DNA-RNA杂交体是真核细胞中的天然存在,其水平在高转录活性位点较高。它们是具有转录调节功能的非规范核酸结构。据报道它们的存在使基因座易于发生染色体断裂。形成DNA:RNA的基因座产生双链A/B中间构象,在互补的、置换的DNA链上具有单链核酸结合蛋白的第二个靶标。它们显示出对DNA甲基转移酶的活性具有抗性。DNA:RNA杂交体的形成与许多神经系统疾病有关。DNA:RNA解旋酶senataxin(SETX)中的突变与4型肌萎缩性侧索硬化症的显性少年形式和2型共济失调性动眼性失用症的隐性形式有关。

特异性

克隆S9.6均等地结合DNA-RNA杂聚物和聚(I)-聚(dC),但是要达到相似的结合程度,需要100倍更高水平的聚(A)-聚(dT)。克隆S9.6不结合单链DNA、双链DNA和RNA以及核糖体RNA(Boguslawski,S.J.,et al.(1986).J. Immunol Methods.89(1):123-130)。
目标DNA-RNA异源双链体(R环)结构不是序列或物种特异性的。

免疫原

通过用DNA依赖性RNA聚合酶转录phi X174单链DNA制备的DNA-RNA杂聚物双链体(Boguslawski,S.J.,et al.(1986).J. Immunol Methods.89(1):123-130)。

应用

抗DNA-RNA杂交体,克隆S9.6,目录号MABE1095号是一种高度特异性的小鼠单克隆抗体,靶向DNA-RNA杂交体,已在亲和结合测定、染色质免疫沉淀(ChIP)、ChIP-seq、斑点印迹、免疫细胞化学和免疫沉淀中进行了检验。
斑点印迹分析:与野生型菌株的提取物相比,0.2 µg/mL的代表性批次检测到来自RNase H缺陷型酵母菌株的基因组提取物中DNA-RNA杂交体的水平增强(由Lorenzo Costantino博士提供,Koshland Lab, University of California at Berkley, U.S.A.)。

亲和结合测定:克隆S9.6均等地结合DNA-RNA杂聚物和聚(I)-聚(dC),但是要达到相似的结合程度,需要100倍更高水平的聚(A)-聚(dT)。克隆S9.6不结合单链DNA、双链DNA和RNA以及核糖体RNA(Boguslawski,S.J.,et al.(1986).J. Immunol Methods.89(1):123-130)。

染色质免疫沉淀(ChIP)分析:在HeLa细胞中,在shRNA介导的BRCA1或BRCA2的敲落(但没有敲落PCID2或RAD51)后,一个代表性批次在四个活跃转录的基因处检测到增加的DNA RNA杂交体(Bhatia,V.,et al.(2014).Nature.511(7509):362-365)。

染色质免疫沉淀(ChIP)分析:一个代表性批次使用HeLa染色质制备物检测到在β-肌动蛋白基因上形成的R环。染色质制备物的RNase H处理阻止了克隆S9.6免疫沉淀目标染色质片段(Skourti-Stathaki,K.,et al.(2011).Mol.Cell.42(6):794-805)。

染色质免疫沉淀-测序(ChIP-seq)分析:一个代表性批次通过ChIP-seq分析检测到发芽酵母中DNA-RNA杂交体的全基因组分布(El Hage,A.,et al.(2014).PLoS Genet.10(10):e1004716)。

免疫细胞化学分析:一个代表性批次通过荧光免疫细胞化学染色对甲醇固定的H1人胚胎干细胞(hESCs)和甲醛固定的HeLa细胞进行免疫定位核R环(Bhatia,V.,et al.(2014).Nature.511(7509):362-365; Ginno, P.A., et al. (2012).Mol.Cell.45(6):814-825)。

免疫沉淀分析:一个代表性批次在体外免疫沉淀转录的R环底物(DNA-RNA杂交体),但非双链DNA(dsDNA)(Ginno,P.A.,et al.(2012).Mol.Cell.45(6):814-825)。
研究类别
表观遗传学&核功能

质量

通过免疫细胞化学在HeLa细胞中进行评估。

免疫细胞化学分析:该抗体以1:50稀释度在4%多聚甲醛固定的0.3% Triton X-100透性化HeLa细胞中免疫定位了核和线粒体DNA-RNA杂交体。

外形

形式:纯化
纯化的小鼠IgG2aκ,溶于含0.1 M Tris-甘氨酸(pH 7.4)、150 mM NaCl和0.05%叠氮化钠的缓冲液中。
纯化蛋白G。

储存及稳定性

自接收之日起,在2-8°C下可稳定保存1年。

其他说明

浓度:请参考特定批次的数据表。

免责声明

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