抗-谷氨酸抗体

谷氨酸

通过与以下化合物的竞争实验，使用ELISA试验测定交叉反应性:

化合物 交叉反应性

谷氨酸-G-BSA 1

天冬氨酸-G-BSA 1/100,000

GABA-G-BSA 1/100,000

谷氨酸 1/100,000

缩写：

(G) 戊二醛

(BSA) 牛血清白蛋白

注释：抗体反应性需要戊二醛固定，因此组织固定程序中需要包括一些戊二醛（0.5%-2.0%），以获得适当的反应性。

谷氨酸-戊二醛-BSA。

免疫组织化学：1:2,500-1:10,000，通过PAP技术在大鼠海马上使用自由浮动切片。

最佳工作稀释度必须由最终使用者进行确定。

通过免疫组织化学/细胞化学检测谷氨酸的方案。大鼠脑的示例。

1. 待制备溶液 - 必须根据需要制备溶液。

溶液A： 0.1 M甲次砷酸盐，10g/L焦亚硫酸钠，pH 6.2。

溶液B： 0.1 M甲次砷酸盐，10g/L焦亚硫酸钠，3-5%戊二醛，pH 7.5。

2. 大鼠灌注 - 用戊巴比妥钠或戊巴比妥麻醉大鼠，并使用装有溶液A（30 mL）的泵通过主动脉进行心内灌注: 150-300 mL/min，溶液B（500 mL）: 150-300 mL/min。

3. 固定后: 在溶液B中15至30分钟，然后在含有8.5 g/L焦亚硫酸钠（pH 7.5）的0.05 M Tris（溶液C）中柔洗4次。

4. 组织切片: 可以使用振动切片机或恒冷箱切片。

5. 还原步骤: 切片用含0.1 M硼氢化钠的溶液C还原10分钟。切片在不含硼氢化钠的溶液C中洗涤4次。

6. 谷氨酸抗体的应用：使用在含有0.1% Triton X100和2%非特异性血清的溶液C中的1:2,500-1:10,000最终稀释液。每2 mL稀释抗体孵育12个切片过夜，+2-8°C。然后将切片在溶液C中洗涤三次，每次10分钟。（注意抗体可能在较高的稀释度下可用。应该探索这一点，以最大程度地减少高背景的可能性。此外，请注意，如方案中所示，缓冲系统的变化可能会改变背景和抗体识别）。然后通过PAP程序揭示特定的反应。

7. 第二抗体：在含有1%非特异性血清的溶液B中用1:50至1:200稀释的山羊抗小鼠孵育切片，在20°C下孵育3小时，或在37°C下孵育1-2小时。然后用溶液C洗涤切片，3次，每次10分钟。

8. PAP：将切片与溶液C中适当稀释的过氧化物酶抗过氧化物酶（自由浮动法）在37°C下孵育1-2小时。然后在溶液C中清洗切片3次，每次10分钟。

9. 可视化：使用在0.05 M Tris中的DAB-4-HCl（25 mg/100 mL）（或其他色原）观察抗原-抗体复合物并过滤；加入0.05%过氧化氢。在室温下孵育切片10分钟。将切片转移至5 mL 0.05 M Tris中终止反应。将切片安装在铬铝涂层载玻片上。37°C干燥过夜。使用常规组织学程序再水化切片。使用快速安装介质的盖玻片。

仅供研究使用；不用作诊断。

抗谷氨酸抗体检测谷氨酸水平，&已发布&验证可用于IH。

研究子类别
神经递质&受体

神经炎症&疼痛

研究类别
神经科学

含有10mM叠氮化钠的PBS中的液体。

形式：纯化

日期后，在2-8°以未稀释的等分试样可保存6个月。

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