Anti-Tryptophan Hydroxylase/Tyrosine Hydroxylase/Phenylalanine Hydroxylase Antibody

PH8 抗体是一种鼠单克隆抗体，可结合色氨酸羟化酶（TRH）、酪氨酸羟化酶（TYH）和苯丙氨酸羟化酶（PAH)）1的共同表位。在参考文献中该单克隆抗体被引用为PH8。酪氨酸羟化酶（TYH）是一种将酪氨酸转化为二羟基苯丙氨（L-多巴）的酶，二羟基苯丙氨是儿茶酚胺神经递质多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素的前体。色氨酸羟化酶（TRH）是一种将5-羟色氨酸转化为5-羟色胺的酶。在新鲜组织中，PH8 抗体结合TYH 和TRH ，因此是含TYH的含儿茶酚胺神经元2和血清素能神经元3、4、6的标记物，色氨酸羟化酶（TRH）可用作5-羟色胺的标记物，因为它将5-羟色氨酸转化为5-羟色胺。5-羟色胺代谢速度快，在死后组织中不能通过抗5-羟色胺抗体检测。 在福尔马林固定的人体组织中，由于酪氨酸羟化酶（TYH）抗原决定簇的变化，PH8抗体仅结合色氨酸羟化酶（TRH）3、4、5。因此PH8抗体可用于特异性识别固定人组织中的血清素能神经元。使用PH8抗体可以在肝组织切片中检测出苯丙氨酸羟化酶（PAH)。

PH8抗体可用识别多巴胺能和血清素能神经元，可用于TYH、PAH和 TRH的免疫印迹、蛋白质印迹、免疫沉淀和免疫组化。

PROTOCOLS

免疫组化

PH8 抗体可用于人和大鼠脑干细胞中多巴胺能和血清素能神经元的免疫组化检测。

1.在使用前应以福尔马林固定并以福尔马林保存组织至少五天。

2.使用溶于0.1M Tris 缓冲液（ pH 7.4）的30%蔗糖冷冻保护组织24-72小时。

3.使用超薄切片机（sledge microtome）切成50 μm 的厚度。

4.在开始染色步骤以前用 Tris 缓冲液清洗组织样品。

5.用50%乙醇处理组织样品3次，每次15分钟。

6.用50%乙醇和3% H2O2处理组织样品20分钟。

7.用溶于Tris缓冲液的10%正常马血清处理组织。 这一操作是为了防止内源性H2O2 染色。

8.在Tris缓冲液中稀释PH8抗体，添加到组织样品中，培养1-3天。推荐稀释度为1：2,000-1：10,000。 在高抗体浓度下，所有多巴胺能神经元被染色，血清素能和儿茶酚胺能细胞之间没有区别。 通过稀释抗体浓缩液可以区别细胞类型，因为染色强度不同。 在较低浓度下（1：5，000-1：10,000稀释度），只有血清素能细胞染色。

9.清洗组织（3次，每次15分钟），然后添加生物素化抗小鼠二抗，并在室温（RT)下在轨道式摇床上培养1小时。

10.清洗组织（3次，每次15分钟），并在室温下以第三复合物（tertiary complex）（ELITE KIT，Vector，美国）在轨道式摇床上培养1小时。

11.清洗组织（3次，每次15分钟），并在室温下在轨道式摇床上与Tris 缓冲的二氨基联苯胺底物一起培养10分钟。 添加0.1% H2O2，并在室温下在轨道式摇床上再培养5分钟。

12.将组织固定到涂胶载玻片（gelatinised slides ）上，在显微镜检查以前让其变干。

该抗色氨酸羟化酶/酪氨酸羟化酶/苯丙氨酸羟化酶抗体（克隆PH8）经验证可用于IHC、IP、WB检测色氨酸羟化酶/酪氨酸羟化酶/苯丙氨酸羟化酶。

免疫球蛋白组分通过蛋白G色谱纯化。浓度2mg/mL的500?g 液体蛋白，溶于磷酸盐缓冲液（PBS）该产品以无菌形式提供-通过 0.22 微米过滤器过滤

形式：纯化

PH8 抗体是在环境温度下运输。 当在2-8°C下储存时，液体材料料可稳定长达6个月。

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