抗-神经丝200 kDa抗体，克隆N52

神经丝是一种中间丝，可作为支持轴突细胞质的细胞骨架的主要元素。 它们是轴突中最丰富的原纤维成分，平均频率是轴突微管的3-10倍。 神经丝（直径10nm）由三个相互缠绕的原纤维构建而成，原纤维本身由单体蛋白质的两个四聚体原丝复合物组成。神经丝三联体蛋白（68/70、160和200 kDa）同时存在于中枢神经系统和周围神经系统中，通常是神经元特异性的。68/70 kDa NF-L蛋白可以自组装成丝状结构，但是160 kDa NF-M和200 kDa NF-H蛋白需要68/70 kDa NF-L蛋白的存在才能共组装。 神经瘤、神经节瘤、神经节神经胶质瘤、神经节神经母细胞瘤和神经母细胞瘤的神经丝染色呈阳性。 尽管通常仅限于神经元，但已在神经节旁瘤以及肾上腺和肾上腺嗜铬细胞瘤中检测到神经丝。类癌、皮肤神经内分泌癌和肺燕麦细胞癌也表达神经丝。 有关更多神经丝信息，请参见CHEMICON技术支持部分下的在线神经系统细胞类型特定标志物图。

MAB5266与正常组织/提取物中神经丝200kDa（NF-H）的磷酸化和去磷酸化H链反应（Shaw，1986）。MAB5266可用于通过免疫组织化学和蛋白质印迹检测起源神经元的细胞。据报道，MAB5266与NF-H的反应性在cdk-5过表达细胞中被阻断（Guidato，1996）。

酶促去磷酸化猪H链的羧基末端尾段。

研究子类别
神经丝&神经元代谢

神经元&神经胶质标志物

研究类别
神经科学

经验证，该抗神经丝200 kDa抗体（克隆N52）可用于WB、IH中检测神经丝200 kDa。

蛋白质印迹：5-10 μg/mL

免疫组织化学：5-10 μg/mL

最佳工作稀释度必须由最终用户确定。

免疫组织化学：抗体N52与位于MPR KSP结构域末端并含有共有cdk-5磷酸化位点的NF-200侧臂片段反应，但是如果NF-200片段被cdk-5磷酸化，则该反应性被消除{Guidato et al，1996}。 因此，对于包括蛋白质印迹在内的最全面的染色和反应性，建议在抗体染色之前用碱性磷酸酶处理样品。 建议采用以下处理方案:



溶液的制备方案:

I. TBS: Tris-HCl，0.1 mol/L；NaCl，0.1 mol/L′ pH 8.0。

II.将碱性磷酸酶，1 mg/ml与1 mol/l ZnSO4、1mol/L MgCl2和1mmol/L PMSF混合；并在TBS中溶解。

注释： 使用前需将碱性磷酸酶对溶液I进行透析。

步骤：

将来自休克冷冻组织样品的冷冻切片风干，然后在-20°C下用丙酮固定10分钟。 使过量的丙酮在室温下蒸发。 将切片在溶液II中于+30°C下孵育4小时，然后在TBS中洗涤3次，每次5分钟。 阴性对照切片在不含碱性磷酸酶的溶液II中孵育。进一步处理如下:

- 用10-20 μl抗体溶液覆盖制备物，并在潮湿箱中孵育1小时。

- 将载玻片浸入TBS中，并在TBS中洗涤3次，每次5分钟。

- 用10-20 μl用异硫氰酸氟标记的抗小鼠Ig抗体溶液覆盖制备物，并在37°C的潮湿箱中孵育1小时。

- 在TBS中清洗载玻片3次，每次5分钟。

形式：纯化

纯化的免疫球蛋白（离子交换色谱法）。 液体形式，溶于0.02 M磷酸盐缓冲液、0.25 M NaCl和0.1%叠氮化钠（pH 7.6）中

以未稀释的等分试样在2-8°C下保存长达6个月。应避免反复冻/融循环。

浓度：关于批次特定浓度请参见检验报告。

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