抗-CD133 抗体（克隆13A4，Alexa Fluor^™488偶联）

Prominin是一种新型质膜蛋白，具有N末端胞外域，位于两个短胞质环和两个大糖基化胞外域两侧的五个跨膜区段以及一个胞质C末端结构域。秀丽隐杆线虫的DNA序列预测存在具有相同特征的蛋白质，这表明prominin在脊椎动物和无脊椎动物之间是保守的。Prominin不仅存在于小鼠胚胎的神经上皮细胞中，而且还存在于小鼠胚胎的各种其他上皮细胞中。在成年小鼠中，已在脑室管膜层和肾小管中检测到prominin。在这些上皮细胞中，prominin特异于顶端表面，在那里它选择性地与微绒毛和微绒毛相关结构相关。值得注意的是，在CHO细胞中表达后，prominin优先定位于质膜突起，例如丝状伪足、片状伪足和微端丝。这些观察结果暗示，突出蛋白包含针对质膜突起而不是平面细胞表面和/或保留在质膜突起中的信息。此外，结果表明，膜蛋白靶向上皮细胞的微绒毛以及靶向非上皮细胞的质膜突起的机制高度相关（Weigmann et al., 1997）。另请参阅（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/prow/guide/438375806_g.htm）以获取有关CD133和prominin表达的更多信息。

识别小鼠Prominin-1，一种五次跨膜（5-TM）结构域糖蛋白。采用mAb 13A4进行的E12小鼠脑和成年小鼠肾的免疫印迹表明，prominin的平均表观分子量为115 kDa；肽N-糖苷酶 F（PNGase F）引起的脑和肾脏prominin的去糖基化产生一条94-kDa条带，说明prominin 是N糖基化的。脑prominin去糖基化产生的额外一条88-kDa条带代表着C末端截短形式（Weigmann et al., 1997; Maw et al., 2000; Roper I, 2000）。Prominin-1在原始细胞上表达，例如造血干细胞和祖细胞、神经&内皮干细胞、视网膜和视网膜母细胞瘤，以及发育中的上皮细胞。迄今为止，Prominin-1的功能和配体尚不清楚。该抗体可用于从大脑和骨髓中分离鼠干细胞。

将主要由神经上皮组成的十个12日龄的NMRI小鼠胚胎（E12，〜1 mg蛋白）的端脑在1 ml PBS中匀浆，与粉碎的硝酸纤维素滤膜（在 0.5 mL PBS为1 cm²）混合作为佐剂，并腹腔注射至LouXSD大鼠（Weigmann et al., PNAS 1997）。

免疫组化：1-15 μg/mL。建议固定剂：2-4% PFA或甲醇，20°C 固定。固定培养的细胞时，将溶于3% PFA的样品在室温下培养15-30分钟。组织：典型条件是在固定后以 2-4% PFA,灌注1-4小时。不推荐传统福尔马林固定。透化方法：0.2% 皂角苷或0.1-0.3% Triton X-100 的PBS溶液封闭缓冲液：对于培养中的细胞，0.2% 明胶PBS溶液；对于组织切片，10% FCS 的PBS溶液。稀释缓冲液：对于培养中的细胞，0.2% 明胶PBS溶液；对于组织切片，0.2%皂角苷和10% FCS 的PBS溶液。培养时间/温度：4°C 下过夜或 37°C下1小时。
注意：该抗体不可用于石蜡包埋的切片。

EM免疫组化：通过免疫金电子显微镜法研究了小鼠E9-10神经上皮细胞和成年肾近端小管细胞中13A4抗原的亚细胞定位。在肾刷状缘膜（kidney brush border membrane）中观察到到强标记，13A4免疫反应性似乎集中在微绒毛的尖端。引入注目的是，在神经上皮细胞中，顶端质膜含有的微绒毛少于肾刷状缘膜中，13A4免疫反应性大多（如果不是完全的话）与微绒毛和质膜突起相关，在顶端质膜的平面区则没有检测到免疫反应性。由于这种有利的定位，13A4 抗原被称为′′prominin′′（来自拉丁语词汇′′prominere，′′ 突出，突起） （Weigmann et al., 1997）。

蛋白质印迹：1-5 μg/mL，0.3% 吐温PBS。样品制备：标准Laemmli （在2% SDS、100mM DTT 或 5% β-巯基乙醇，60mM Tris-HCL（pH 6.8）中煮沸）。优选凝胶百分比：7.5%。建议的封闭缓冲液：3-5 g/mL牛奶，0.3% 吐温PBS。孵育时间：室温下1小时，或4°C下过夜。 建议的对照提取物：阳性：肾膜；阴性：肝膜。

免疫沉淀：10-25 μg/mL。建议的组织/细胞裂解缓冲液：RIPA缓冲液。总反应物体积：500-1000 μL。反应混合物中的最终总蛋白浓度： 0.5-3 mg/mL。孵育时间： 4°C下过夜。使用的捕捉剂：G蛋白琼脂糖^™ 或兔抗大鼠抗体//A 蛋白琼脂糖。在免疫印迹中的预期尺寸 （kDa）：115 kDa（成熟形式）和105 kDa（前体形式）。

FACS 分析：建议的稀释度/细胞数目：0.25-1μ g/百万细胞。使用的固定剂/透化剂：BD FACS 裂解溶液（1-1.5% 甲醛）（BD 和FACS 是美国BD公司的商标） 未透化。建议的对照：造血干细胞

最佳工作稀释度必须由最终用户进行确定。

抗-CD133 抗体（克隆13A4，Alexa Fluor488偶联）是针对CD133的抗体，用于FC。

研究子类别
神经干细胞

造血干细胞

研究类别
干细胞研究

在磷酸盐缓冲液中的液体，其中含有15 mg/mL BSA作为稳定剂和0.1%叠氮化钠。

纯化蛋白A

以未稀释等分试样可在2–8°C避光冷藏保存长达24个月。

对照
人胚胎干细胞、Caco 2 （人结肠癌细胞系）全细胞裂解液

浓度：请参考批次特异性浓缩物的检验报告。

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