一般描述
胸苷类似物5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)是用于细胞增殖测定和凋亡细胞检测的常用试剂。BrdU很容易掺入新合成的DNA中,标志物已经经历细胞周期S期的细胞,从而充当增殖细胞的标志物。
特异性
识别BrdU(溴脱氧尿苷)。
应用
抗BrdU抗体(克隆131-14871)是用于检测溴脱氧尿苷(也称为BrdU)的小鼠单克隆抗体,&已在FC、IHC、IHC(P)中进行了验证。 该溴脱氧尿苷抗体预期在所有物种中均发生反应。
研究子类别
细胞周期、DNA复制&修复
细胞周期、DNA复制&修复
研究类别
表观遗传学&核功能
表观遗传学&核功能
针对肾、十二指肠和肝组织去石蜡切片的免疫组织化学:1:1000-1:1250。
针对100 μL 106个细胞的流式细胞术: 1:5000。
最佳稀释度必须由最终用户确定。
免疫组织化学程序
用于石蜡包埋组织切片
染色程序:
1.在二甲苯中脱蜡切片3 × 5分钟。树脂包埋或GMA(甲基丙烯酸乙二醇酯、甲基丙烯酸2-羟乙酯)处理的切片由于没有石蜡,因此无需脱蜡。
2.每隔2分钟将载玻片置于梯度乙醇(100、95、90%)水溶液中,并风干。(GMA部分略)
3.用PAP笔或金刚石笔圈出部分,以识别并彻底干燥。
4.对于GMA或树脂切片,将载玻片置于0.5% Tween/PBS(pH 7.6)中29分钟。
5.在预热(40°C)的1N HCl中孵育1小时。
6.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 3分钟。此时可以保存切片,并在第二天继续进行该程序。
7.对于NBF(正常缓冲福尔马林)固定的组织,在室温下于1X胰蛋白酶溶液(0.02-0.05% w/v,预热至40°C)中孵育20分钟,对于Carnoy′s固定的组织,孵育10分钟。
8.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 5分钟。
9.将切片在1% H2O2(10 mL 30% H2O2 in 290 mL甲醇)中孵育20分钟,或将GMA切片在3% H2O2(10 mL 30% H2O2 in 90 mL水)中孵育3分钟。
10.用PBS(pH 7.6)清洗2 × 2分钟。
11.使用Vector ABC试剂盒,在10 mL PBS中加入3滴正常马血清。用该溶液在室温下封闭载玻片20分钟。
12.吸干过量正常马血清的载玻片,并与在PBS/BSA/吐温20中稀释的MAB4072在室温下孵育1小时。
13.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 3分钟。
14.向10 mL PBS中加入3滴正常马血清,然后加入1滴生物素化抗体储备液。将玻片与稀释的第二抗体在室温下孵育30分钟。
15.向5 mL PBS中加入2滴试剂A,制备Vectastain ABC试剂。然后向同一混合瓶中加入2滴试剂B。使用前静置约30分钟。
16.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 3分钟。
17.在室温下用ABC试剂孵育载玻片30分钟。
18.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 3分钟。
19.通过混合等体积的0.02% H2O2(由30%贮备液在蒸馏水中制备)和0.1%DAB(在0.1 M Tris缓冲液(pH 7.2)中制备)制备底物。H2O2应从浓缩储备液中新鲜制备。由于许多过氧化物底物在H2O2存在下或暴露于光线下不稳定,因此应在使用前准备底物。由于DAB是一种可疑的致癌物,因此在处理和处置所有过氧化物酶底物时应格外小心。
20.用DAB底物染色载玻片2-5分钟。
21.用蒸馏水清洗2 × 2分钟。
22.用苏木精复染,通过二甲苯脱水,然后盖上盖玻片。
针对100 μL 106个细胞的流式细胞术: 1:5000。
最佳稀释度必须由最终用户确定。
免疫组织化学程序
用于石蜡包埋组织切片
染色程序:
1.在二甲苯中脱蜡切片3 × 5分钟。树脂包埋或GMA(甲基丙烯酸乙二醇酯、甲基丙烯酸2-羟乙酯)处理的切片由于没有石蜡,因此无需脱蜡。
2.每隔2分钟将载玻片置于梯度乙醇(100、95、90%)水溶液中,并风干。(GMA部分略)
3.用PAP笔或金刚石笔圈出部分,以识别并彻底干燥。
4.对于GMA或树脂切片,将载玻片置于0.5% Tween/PBS(pH 7.6)中29分钟。
5.在预热(40°C)的1N HCl中孵育1小时。
6.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 3分钟。此时可以保存切片,并在第二天继续进行该程序。
7.对于NBF(正常缓冲福尔马林)固定的组织,在室温下于1X胰蛋白酶溶液(0.02-0.05% w/v,预热至40°C)中孵育20分钟,对于Carnoy′s固定的组织,孵育10分钟。
8.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 5分钟。
9.将切片在1% H2O2(10 mL 30% H2O2 in 290 mL甲醇)中孵育20分钟,或将GMA切片在3% H2O2(10 mL 30% H2O2 in 90 mL水)中孵育3分钟。
10.用PBS(pH 7.6)清洗2 × 2分钟。
11.使用Vector ABC试剂盒,在10 mL PBS中加入3滴正常马血清。用该溶液在室温下封闭载玻片20分钟。
12.吸干过量正常马血清的载玻片,并与在PBS/BSA/吐温20中稀释的MAB4072在室温下孵育1小时。
13.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 3分钟。
14.向10 mL PBS中加入3滴正常马血清,然后加入1滴生物素化抗体储备液。将玻片与稀释的第二抗体在室温下孵育30分钟。
15.向5 mL PBS中加入2滴试剂A,制备Vectastain ABC试剂。然后向同一混合瓶中加入2滴试剂B。使用前静置约30分钟。
16.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 3分钟。
17.在室温下用ABC试剂孵育载玻片30分钟。
18.用PBS(pH 7.6)清洗3 × 3分钟。
19.通过混合等体积的0.02% H2O2(由30%贮备液在蒸馏水中制备)和0.1%DAB(在0.1 M Tris缓冲液(pH 7.2)中制备)制备底物。H2O2应从浓缩储备液中新鲜制备。由于许多过氧化物底物在H2O2存在下或暴露于光线下不稳定,因此应在使用前准备底物。由于DAB是一种可疑的致癌物,因此在处理和处置所有过氧化物酶底物时应格外小心。
20.用DAB底物染色载玻片2-5分钟。
21.用蒸馏水清洗2 × 2分钟。
22.用苏木精复染,通过二甲苯脱水,然后盖上盖玻片。
外形
形式:纯化
液体形式,用于含150 mM NaCl和0.1%叠氮化钠的10 mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中。
纯化蛋白A
储存及稳定性
自运输之日起,在-20°C下可保存2年。分装保存以避免反复冻融。为了最大程度地回收产品,需在融化后和取下盖子之前将原始样品管进行离心。
分析说明
对照
Brdu处理细胞
Brdu处理细胞
其他说明
浓度:关于批次特定浓度请参见检验报告。
法律信息
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
免责声明
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WGK
WGK 2
闪点(°F)
Not applicable
闪点(°C)
Not applicable
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