抗结蛋白抗体，克隆DE-B-5

该抗体与人、猪、大鼠和taod的肌间线蛋白反应。 在组织切片中，该抗体用于染色骨骼、心脏、内脏和一些血管平滑肌细胞。 RD（ATCC CCL 136）和仓鼠BHK-21等细胞系均为阳性（Debus et al.，1983）。

纯化的肌间线蛋白。

使用已经验证可用于WB、IH、IH(P)、IH(P) 的抗-肌间线蛋白抗体克隆DE-B-5检测肌间线蛋白。

免疫细胞化学：(5 μg/ml )免疫组化: （5 μg/mL）预稀释和详细石蜡方案见IHC2011-6。



最佳工作稀释度必须由最终用户进行确定。

免疫组织/细胞化学方案

理想的标本是从速冻组织样品的冷冻切片中获得的。冰冻切片置空气中干燥后用丙酮在-20°C下固定10min。使过量的丙酮在15-25°C下蒸发。也可以使用酒精固定和石蜡包埋的物料（2）。甲醛固定将降低或消除染色强度，具体取决于执行的条件。 其他固定条件必须先由研究者测试。

在15-25°C下用胎牛血清覆盖切片20-30分钟，有利于阻断非特异性结合位点。在应用抗体溶液之前，通过倾析除去过量的胎牛血清。

单细胞或细胞涂片的细胞离心制备物也固定在丙酮中。但是，这些制备物不应在空气中干燥。而是通过在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中短暂洗涤来除去多余的丙酮。

进一步的处理如下：

• 用10-20μ l抗体溶液覆盖制备物，并在37°C的湿度箱中培养1小时。

• 将载玻片短暂浸入PBS中，然后在PBS中3分钟洗涤3次（每种情况下均使用新鲜的PBS浴）。

• 擦干制备物的边缘，用10-20 μl抗小鼠Ig-FITC溶液或抗小鼠IgG-过氧化物酶溶液覆盖制备物，并在湿度箱中于37°℃下培养1小时。

• 如上所述清洗载玻片。

在任何步骤中，不得使制备物干燥。

如果使用间接免疫荧光技术，则应使用合适的包埋介质（例如Moviol，Hoechst）覆盖制备物，并在荧光显微镜下检查。 如果将POD偶联物用作二抗，则应使用底物溶液（见下文）覆盖制备物，并在15-25°℃下培养直至出现清晰可见的红棕色。 在此培养期间，阴性对照（例如仅二抗）的颜色应保持不变。 随后，用PBS洗去底物，如果需要，将制备物用hemalum染色剂染色约1分钟。用PBS洗去hemalum溶液；将制备物包埋并检查。

底物溶液：

氨乙基咔唑： 将2 mg 3-氨基-9-乙基咔唑溶于1.2 ml二甲基亚砜并加入28.8 ml 50 mM Tris-HCl、pH值7.3和20 μl 3%H 2 O 2（w/v）中。每天制备新鲜溶液。 二氨基联苯胺： 将25 mg 3，3′-二氨基联苯胺溶于50 ml 50 mM Tris-HCl，pH值7.3并加入40 μl 3%H 2 O 2（w/v）。 每天制备新鲜溶液。

研究子类别
细胞骨架

研究类别
细胞结构

蛋白质印迹分析： 1:1000 稀释

替代品：04-585

0.02 M磷酸盐缓冲液，0.25M NaCl和0.1%叠氮化钠，pH值7.6的液体。

形式：纯化

抗体以未稀释的等分试样可在2-8°C冷藏保存长达6个月。不可冷冻。

浓度：请参考批次特异性浓缩物的分析证书。

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