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一般描述
溴脱氧尿苷（Bromodeoxyuridine，BrdU）是一种胸苷类似物，在DNA合成过程中特异性地掺入DNA中。抗溴脱氧尿苷单克隆抗体用于鉴定已掺入BrdU的细胞。 与使用放射性胸苷掺入来鉴定正在复制的细胞相比，该免疫学检测方案具有多个优势。标记和检测可以在同一天进行，而不是像氚标记的细胞放射自显影所要求的那样等待几天，并且消除了使用多个标本获得最佳暴露时间的必要性。此外，通过流式细胞术分析进行抗溴脱氧尿苷染色可以同时评估多个参数。 抗溴脱氧尿苷单克隆抗体已用于鉴定血液（Campana et al.，1988）、组织（Schutte et al.，1987；Hayashi et al.，1988）、肿瘤（Hoshino et al.，1986；Morstyn et al.，1983）中的增殖细胞，以及用于测定浆细胞标记指数（Greipp et al.，1985）。
特异性
与溴脱氧尿苷结合并与碘尿苷（10%）交叉反应。抗溴脱氧尿苷不会与氟脱氧尿苷或任何内源性细胞成分（例如胸苷或尿苷）发生交叉反应。
免疫原
溴脱氧尿苷-牛血清白蛋白浓缩液
应用
使用经FC、ICC、IHC验证的抗BrdU抗体克隆AH4H7-1/131-14871（小鼠单克隆抗体）检测溴脱氧尿苷（也称为BrdU）。
免疫组化：（6μ g/mL）
流式细胞术：（0.2 μg/100μL/10E6细胞）最佳工作稀释度必须由最终用户确定。
应用
流式细胞术：以下方法基于M. Vanderlaan et al. (1986)的方法。该方法的变体存在于文献中，一个考虑因素是各种固定程序对不同细胞群的光散射特性的影响。步骤：
1.为了标记细胞，用10 μM溴脱氧尿苷脉冲30分钟。从培养物中收获细胞。
2.将细胞在70%乙醇中于+2-8°C固定至少30分钟。通过将细胞重悬于1 mL冷却的含0.5%Triton X-100的0.1 M HCI中来提取组蛋白；将混悬剂在冰上培养10分钟。用5 mL蒸馏水稀释酸，200 x g离心10 min。用2 mL蒸馏水重悬细胞。
3.将细胞悬液浸入沸水浴10min使细胞DNA变性。之后，通过将细胞悬液置于冰浆中数分钟来迅速冷却。在含有0.5%Triton X-100的PBS中洗涤细胞。
4.将细胞（1-2 x 10 6个细胞）重悬于100 μL溶液中，该溶液含有约2μ g/mL抗溴脱氧尿苷抗体，用含0.1%BSA的PBS稀释（0.2μ g/试验）。在室温下培养30分钟。用PBS洗涤细胞。
5.将细胞重悬于100μ L用PBS稀释的山羊抗小鼠IgG-FlTC洗涤细胞中。
应用（浓度）
免疫组化：下面是对在体内或体外对已经用BrdU标记的细胞进行染色的程序。该程序基于B.Schutte et al.（1987）和D.Campana et al.（1988）的方法。
组织的制备：
给动物注射50 mg BrdU/kg体重。1小时后处死动物，取出研究中的器官或组织。将组织包埋在OCT培养基中，浸入液氮中速冻。用低温恒温器切成4 mm的冰冻切片。将切片放在白蛋白或明胶包被的载玻片上。
细胞的制备：
用10 mM BrdU脉冲细胞60分钟。在盖玻片上生长的细胞或由混悬剂中生长的细胞制成的细胞离心制剂可根据以下程序用于抗溴脱氧尿苷染色。
程序
1.将组织切片或细胞（在载玻片或盖玻片上）在+2-8°C下浸入无水甲醇中10分钟，以进行固定（在载玻片或盖玻片上）。从固定液中取出后风干。载玻片可在-20°C下储存于密封盒中，或再水化以准备用于测定程序。将其浸入PBS中3分钟以再水化。
2.将载玻片在2 N HCl中于+37°C下培养60分钟，使DNA变性。
3.将载玻片浸入0.1 M硼酸盐缓冲液（pH值8.5）中和酸。在10分钟内更换缓冲液两次。
4.用PBS洗涤载玻片，在10分钟内更换溶液3次。
5.将载玻片置于加湿室（例如，用湿纸巾分层的密封塑料盒）中，并用150-300 μL溶液覆盖细胞，该溶液含有用含0.1%BSA的PBS稀释的约6 g/mμL抗溴脱氧尿苷抗体。在室温下培养60分钟。
6.用PBS洗涤载玻片，在10分钟内更换溶液3次。
7.应用最佳稀释度的第二种抗体偶联物（例如，抗小鼠IgG-过氧化物酶），培养，洗涤，并用产生不溶产物的底物进行检测。检测后，如果需要，用Harris修饰的苏木精复染。然后可以将载玻片脱水并固定。
流式细胞术：（0.2 μg/100μL/10E6细胞）最佳工作稀释度必须由最终用户确定。
应用
流式细胞术：以下方法基于M. Vanderlaan et al. (1986)的方法。该方法的变体存在于文献中，一个考虑因素是各种固定程序对不同细胞群的光散射特性的影响。步骤：
1.为了标记细胞，用10 μM溴脱氧尿苷脉冲30分钟。从培养物中收获细胞。
2.将细胞在70%乙醇中于+2-8°C固定至少30分钟。通过将细胞重悬于1 mL冷却的含0.5%Triton X-100的0.1 M HCI中来提取组蛋白；将混悬剂在冰上培养10分钟。用5 mL蒸馏水稀释酸，200 x g离心10 min。用2 mL蒸馏水重悬细胞。
3.将细胞悬液浸入沸水浴10min使细胞DNA变性。之后，通过将细胞悬液置于冰浆中数分钟来迅速冷却。在含有0.5%Triton X-100的PBS中洗涤细胞。
4.将细胞（1-2 x 10 6个细胞）重悬于100 μL溶液中，该溶液含有约2μ g/mL抗溴脱氧尿苷抗体，用含0.1%BSA的PBS稀释（0.2μ g/试验）。在室温下培养30分钟。用PBS洗涤细胞。
5.将细胞重悬于100μ L用PBS稀释的山羊抗小鼠IgG-FlTC洗涤细胞中。
应用（浓度）
免疫组化：下面是对在体内或体外对已经用BrdU标记的细胞进行染色的程序。该程序基于B.Schutte et al.（1987）和D.Campana et al.（1988）的方法。
组织的制备：
给动物注射50 mg BrdU/kg体重。1小时后处死动物，取出研究中的器官或组织。将组织包埋在OCT培养基中，浸入液氮中速冻。用低温恒温器切成4 mm的冰冻切片。将切片放在白蛋白或明胶包被的载玻片上。
细胞的制备：
用10 mM BrdU脉冲细胞60分钟。在盖玻片上生长的细胞或由混悬剂中生长的细胞制成的细胞离心制剂可根据以下程序用于抗溴脱氧尿苷染色。
程序
1.将组织切片或细胞（在载玻片或盖玻片上）在+2-8°C下浸入无水甲醇中10分钟，以进行固定（在载玻片或盖玻片上）。从固定液中取出后风干。载玻片可在-20°C下储存于密封盒中，或再水化以准备用于测定程序。将其浸入PBS中3分钟以再水化。
2.将载玻片在2 N HCl中于+37°C下培养60分钟，使DNA变性。
3.将载玻片浸入0.1 M硼酸盐缓冲液（pH值8.5）中和酸。在10分钟内更换缓冲液两次。
4.用PBS洗涤载玻片，在10分钟内更换溶液3次。
5.将载玻片置于加湿室（例如，用湿纸巾分层的密封塑料盒）中，并用150-300 μL溶液覆盖细胞，该溶液含有用含0.1%BSA的PBS稀释的约6 g/mμL抗溴脱氧尿苷抗体。在室温下培养60分钟。
6.用PBS洗涤载玻片，在10分钟内更换溶液3次。
7.应用最佳稀释度的第二种抗体偶联物（例如，抗小鼠IgG-过氧化物酶），培养，洗涤，并用产生不溶产物的底物进行检测。检测后，如果需要，用Harris修饰的苏木精复染。然后可以将载玻片脱水并固定。
研究子类别
细胞周期，DNA 复制&修复
细胞周期，DNA 复制&修复
研究类别
表观遗传学&核功能
表观遗传学&核功能
目标描述
取决于能检测到的溴脱氧尿苷结合蛋白的分子量。
联系
替代品：MAB1467
外形
10 mM磷酸盐缓冲液中的液体，pH值7.4，含150 mM NaCl和0.1%叠氮化钠
形式：纯化
纯化的蛋白 A
储存及稳定性
自装运之日起在-20°C可保存6个月。等分以避免反复冻融。为了最大程度地回收产品，在融化后和取下盖子之前，将原始样品瓶进行离心。
分析说明
对照
掺入BrdU后，含全部DNA的物种
掺入BrdU后，含全部DNA的物种
其他说明
浓度：请参考批次特异性浓缩物的分析证书。
法律信息
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
免责声明
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WGK
WGK 2
闪点(°F)
Not applicable
闪点(°C)
Not applicable
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