蛋白G Plus/蛋白A-琼脂糖

与琼脂糖共价结合的蛋白G PLUS和蛋白A的混合物。可用于从生物体液中纯化IgG。

设计用于低压力下的免疫球蛋白纯化。产品尺寸是指填充微珠的体积。

抗体纯化

毒性：标准处理（A）

PBS 中 50%混悬剂。

注：产品尺寸是指填充微珠的体积。该产品可直接与血清、血浆、组织培养基、腹水或其他生物体液一起使用，但如果有足够数量的起始物料，我们建议进行初始清洁步骤。如果在清洁步骤中从免疫球蛋白中除去聚集蛋白和脂质，则色谱柱寿命将大大延长。每毫升血清使用5-10毫升填充的珠子。



IgG纯化的推荐方案



缓冲液



所述的所有浓度均用于工作溶液，而不是10X浓缩液。注意：叠氮化钠是有毒的。



•结合/洗涤缓冲液：100 mM磷酸钠pH值7.0、150 mM氯化钠、5 mM钠EDTA、0.01%叠氮化钠。

•洗脱缓冲液A（见注释部分）：500 mM醋酸铵pH值3.0，0.01%叠氮化钠。

•洗脱缓冲液B：10 mM甘氨酸/HCl pH值3.0和0.01%叠氮化钠。

•中和缓冲液：500 mM Tris碱，0.01%叠氮化钠。

•贮备液：100 mM磷酸钠，pH值7.0，0.01%叠氮化钠。



方案



A。清理和浓缩

腹水和血清应在室温下凝结，在4°C冷藏过夜（以使凝块收缩并分离脂质），并多次离心以去除全部凝结的蛋白和脂质。用玻璃棒或小木棍将离心管顶部的脂质去除。应将组织培养基离心或过滤以除去聚集体。

IgG可以通过硫酸铵沉淀步骤进行浓缩和部分纯化。搅拌下添加硫酸铵至50%饱和度（313 g/L），并通过加入1 M HCl或NaOH检查pH值是否调节至7.0。离心以收集沉淀的免疫球蛋白，溶解在结合缓冲液中，并使用相同的缓冲液进行透析。



B.纯化

1.用琼脂糖结合物填充色谱柱

2.用约20倍柱体积的洗涤/结合缓冲液洗涤，直至洗脱液的pH值为7.0.

3.如果先前未针对结合缓冲液透析IgG，则将含IgG的样品稀释或透析到洗涤/结合缓冲液中（pH值6.5-7.5）。

4.将样品上样至色谱柱。

5.用洗涤/结合缓冲液洗涤，直到洗脱液在280 nm处的吸光度接近背景水平。

6.用洗脱缓冲液A洗涤以洗脱IgG，并收集组分直至A₂₈₀恢复至背景水平。

7.用洗脱缓冲液B洗涤，收集组分直至A₂₈₀恢复至背景。大多数IgG应该用缓冲液A洗脱。

8.加入等体积的中和缓冲液中和洗脱的IgG组分，并用pH值试纸检查pH值。为了获得最佳结果，请立即中和洗脱液。

9.为了立即重复使用色谱柱，重复步骤2的步骤。

10.为准备储存用色谱柱，用5倍柱体积的洗脱缓冲液B清洗色谱柱。

11.为储存色谱柱，使用30倍柱体积的储存缓冲液清洗；然后密封色谱柱出口并储存在冰箱中。

12.使用以下公式对纯化的IgG进行定量：



280 nm处的吸光度/1.4=浓度（mg/mL）。



为了制备洗脱缓冲液A，从乙酸开始，用氢氧化铵将pH值调节至3.0。

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