肥大细胞脱颗粒检测试剂盒

引言

脱颗粒，即细胞质颗粒的分泌，是白细胞（例如嗜碱性粒细胞，中性粒细胞，嗜酸粒细胞和肥大细胞）炎症反应的关键步骤。 除组胺外，这些分泌颗粒还含有许多促炎介质，包括肝素、细胞因子、趋化因子和许多蛋白酶（Hallgren，2001）。 类胰蛋白酶是一种四聚体丝氨酸蛋白酶，已成为肥大细胞颗粒的主要成分，占来自肺、结肠和皮肤组织的肥大细胞总蛋白的20%（He，2004；He，1998；Schwartz，1986）。 由于类胰蛋白酶几乎完全储存在肥大细胞中，因此它是肥大细胞活化的常用指标，也是过敏性疾病中治疗性干预的靶标。 Chemicon肥大细胞脱颗粒检测试剂盒提供了一种快速、有效和灵敏的系统，用于评估细胞裂解物、上清液中的类胰蛋白酶活性或用于抑制剂筛选。



检验原理

Chemicon′肥大细胞脱颗粒检测试剂盒为测定类胰蛋白酶活性提供了一种简单方便的方法。 该测定基于从标记的底物tosyl-gly-pro-lys-pNA裂解后发色团对硝基苯胺（pNA）的分光光度法检测。 然后可以使用分光光度计或微量滴定板读数器在405 nm处定量游离pNA。 提供pNA标准品作为比较对照。

钙离子载体A23187（钙霉素）包含在样品脱颗粒诱导试剂盒中。 钙霉素是人肥大细胞释放类胰蛋白酶的一种有据可查的诱导剂（2，3）。

包括类胰蛋白酶抑制剂鱼精蛋白作为用于筛选目的的测试抑制剂。 鱼精蛋白是一种强效肝素拮抗剂，可竞争性结合肝素（肥大细胞类胰蛋白酶的一种重要稳定因子）（Hallgren，2001；Schwartz，1986）。 已证明鱼精蛋白可抑制人和小鼠类胰蛋白酶（Hallgren，2001）。 试剂盒′分析缓冲液含有用于稳定类胰蛋白酶的肝素。

肥大细胞脱颗粒检测试剂盒提供了一种快速、有效&灵敏的系统，用于评价培养上清液、细胞裂解物或其他含类胰蛋白酶样品中的类胰蛋白酶活性。

肥大细胞脱颗粒检测试剂盒提供了一种快速、有效和灵敏的系统，用于评价培养上清液、细胞裂解物或其他含类胰蛋白酶样品中的类胰蛋白酶活性。 纯化的类胰蛋白酶的检验，体外抑制剂筛选和细胞脱颗粒的研究也可以通过该测定法进行。

Chemicon肥大细胞脱颗粒检测试剂盒预期仅供研究使用，不用于诊断或治疗应用。

类胰蛋白酶阳性对照（部件号2003650）：20 μL 0.1 mg/mL溶液。

5X分析缓冲液（部件号2003649）：20 mL含0.1%肝素。

钙离子载体A23187（部件号2003652）：100 μL的1 mM DMSO溶液。

类胰蛋白酶抑制剂（鱼精蛋白）（部件号2003651）：250 μL 10 mM溶液。

类胰蛋白酶底物（tosyl-gly-pro-lys-pNA）（部件号90569）：3.125 mg。

pNA标准品（部件号90085）：250μ L的10 mM DMSO溶液。

在-20°C下储存试剂盒材料（如提供的），直至其有效期。 有关组分的具体说明，请参见试剂贮藏。

试剂贮藏

1.类胰蛋白酶阳性对照在2-8°C下解冻小瓶。 等分并在-20°C下储存至小瓶′有效期。 应避免多个冻/融循环。

2.5X分析缓冲液：用去离子水稀释5X分析缓冲液。 搅拌至均匀，并在2-8°C下储存至其有效期。

3.钙离子载体A23187：在2-8°C下解冻小瓶。 等分并在-20°C下储存至小瓶′有效期。 应避免多个冻/融循环。

4.类胰蛋白酶抑制剂：在2-8°C下解冻小瓶。 等分并在-20°C下储存至小瓶′有效期。 应避免多个冻/融循环。

5.类胰蛋白酶底物：用2 mL 1X分析缓冲液（2.5 mM贮备液）复溶。 等份并在-20°C保存长达3个月。 应避免多个冻/融循环。

6. pNA标准品：在2-8°C下解冻小瓶。 等分并在-20°C下储存至小瓶′有效期。 应避免多个冻/融循环。

注意：阳性对照，底物，pNA标准品和钙离子载体对光敏感；应使用琥珀色小瓶或同等产品。在储存过程中，尽可能使材料避光保存。

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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