MDR1外流检测

多药抗性直接染料外排活性试剂盒旨在通过测定细胞挤出这些蛋白的荧光转运底物的能力，直接测量MDR1、MRP1和BCRP的功能活性。 该试剂盒可用于测量不同细胞群之间MDR1、MRP和BCRP活性的相对量。 此外，染料外排试验可用于评估未标记小分子作为MDR1、MRP1和BCRP转运底物的能力，以及候选抑制剂阻止这些蛋白性能的能力。

试剂盒中包含两种方便配制的MDR1、MRP1和BCRP底物染料溶液，DiOC2（3）溶液和罗丹明123溶液，以使外排探针的底物特异性具有研究者灵活性。 此外，还提供了MDR1和MRP1的非荧光底物长春碱溶液作为染料外排的竞争性抑制剂。 DMSO作为长春碱溶液的稀释剂对照。 提供无菌、浓缩RPMI-1640和BSA作为缓冲液组分，用于程序的上样、外排和洗涤步骤。 庆大霉素的无菌浓缩溶液已被证明不是MDR1的底物（Mechetner and Roninson, 1992），作为缓冲液的可选抗生素提供。 包括碘化丙啶溶液以识别死细胞并未对其进行分析。

最好通过流式细胞仪分析荧光染料的流出程度。 该试验还可与免疫染色实验结合，用于细胞表面标志物表达和MDR1、MRP1和BCRP功能的多色分析。 MDR1、MRP1和BCRP介导的外排也可以通过在荧光显微镜或荧光酶标仪上进行分析来定量。

MDR1及其相关物质的外排活性对温度高度敏感。 MDR1在37ºC附近具有最佳功能，但在4ºC时实际上失活。 预装MDR1荧光底物的MDR1表达细胞保留了染料，因此在4ºC下孵育时具有高荧光（图1，4ºC，上图）。 相反，在37ºC下孵育的细胞更容易流出染料，并显示荧光减弱（图1，37ºC+DMSO，中间图）。 该试剂盒还包括一种特异性抑制剂长春碱，它也是MDR1的底物，并竞争性地阻断DiOC2（3）和罗丹明123的流出。 因此，在37ºC的外排反应中加入过量的长春碱会产生高荧光（图1，37ºC+长春碱，下图）。

仅限研究用途；不可用于诊断或体内程序

多药抗性直接染料外排测定试剂盒包括两个最典型&最常用的多药抗性ABC转运蛋白底物，DiOC2（3）&罗丹明123。

研究类别
细胞结构

无菌5x RPMI-1640（产品编号90302）-一瓶含有200 ml无菌5x浓缩RPMI-1640。

无菌30%BSA（产品编号90303）-一瓶含有35 ml无菌过滤的30%牛血清白蛋白（BSA）的PBS溶液。

庆大霉素溶液，1000x（产品编号90353）-一瓶含有1 ml无菌过滤的50 mg/ml庆大霉素。

DiOC2（3）溶液（产品编号90299）-一瓶含有50 μl溶于DMSO的1 mg/ml DiOC2（3）（3，3′-二乙基氧杂碳菁碘）。

罗丹明123溶液（产品编号90300）-一瓶含有0.5 ml溶于DMSO的1 mg/ml罗丹明123。

长春碱溶液（产品编号90301）-一瓶含有150 μl溶于DMSO的22 mM长春碱。

DMSO（产品编号90294）-一瓶含有150 μl DMSO。

碘化丙啶储备液（产品编号90296）-一瓶含有1 ml溶于PBS的50 μg/ml碘化丙啶。

试剂盒组件到达时应在2-8°C下保存。 产品在接收后可稳定保存1年。 DiOC2（3）溶液、罗丹明123溶液、长春花碱溶液和DMSO会在2-8°C下冷冻，至少可以解冻和重新冷冻5次。 DiOC2（3）、罗丹明123和碘化丙啶溶液都避光。

注意事项
如果处理不当，碘化丙啶、庆大霉素、长春碱、罗丹明123和DiOC2（3）可能会产生毒性作用。 DMSO通过皮肤吸收，可以促进有毒物质的内化。 处理这些组分时要小心。 标准预防措施包括戴手套和穿实验服。

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