InnoZyme组织蛋白酶L活性试剂盒，荧光

一种用于检测人和小鼠样品中组织蛋白酶 L 的高灵敏度和选择性荧光检测法。用荧光底物 Z-Phe-Arg-AMC 检测组织蛋白酶 L（最大值激发波长：360 nm；最大发射波长：460 nm）。通过掺入抑制剂 CA 074（一种组织蛋白酶 B 特异性抑制剂）消除了组织蛋白酶 B 的干扰。该试剂盒还可用于筛选组织蛋白酶 L 抑制剂。

组织蛋白酶 L 底物、AMC 校准标准品、组织蛋白酶 L 对照、组织蛋白酶 L 活化剂、CA 074、组织蛋白酶 L 抑制剂、检测缓冲液、样品缓冲液、稀释液、微孔板、板密封剂和说明书。

毒性：多个毒性值，请参阅 MSDS（O）

试验时间：1.5 - 2 h

Calbiochem InnoZyme 组织蛋白酶 L 活性试剂盒适用于使用纯化的制剂、细胞裂解液和组织提取物测量组织蛋白酶 L 的活性，以及筛选组织蛋白酶 L 抑制剂。该测定法不适用于测量组织蛋白酶 B 的活性。

该试剂盒提供了进行检测所需的所有试剂。使用前，将组织蛋白酶 L 对照试剂（参见下文）以外的所有试剂均置于室温。•AMC 校准标准品：AMC 校准标准品以 2 mM 的储备溶液形式提供。生成校正曲线的推荐浓度范围是 0.156-20 µM。制备下表 A 所示的校正 AMC 标准品的系列稀释液。转移液体之前先将每种稀释液涡旋，并在吸取每种稀释液时注意更换移液器吸头。•组织蛋白酶 L 对照：用样品缓冲液稀释组织蛋白酶 L 对照（10 µg/ml 储备液）来制备所需数量的组织蛋白酶 L 对照样品，浓度范围为 1.56-100 ng/ml。通常推荐的浓度为 0.078-5 ng/50 µl。使用前解冻并制备稀释的组织蛋白酶 L 对照。将剩余的组织蛋白酶 L 对照液等分并在冻存在 -70°C。•活化缓冲液：为了测量生物样品中的组织蛋白酶 L 活性，制备足够的活化缓冲液，50 µl/孔。在检测缓冲液中稀释还原试剂（1：125）和 CA 074 抑制剂（1：100）。例如：要制备 1 ml 的活化缓冲液（足以用于 16 孔试纸），在 982 µl 的检测缓冲液中添加 10 µl CA 074 抑制剂和 8 µl 还原试剂注意：要制备用于组织蛋白酶 L 抑制剂筛选的活化缓冲液不要在活化缓冲液中添加 CA 074 抑制剂；仅添加还原试剂即可。•组织蛋白酶 L 抑制剂工作溶液（1X）：用稀释液稀释组织蛋白酶 L 抑制剂（1：100）。示例：要制备 1ml 组织蛋白酶 L 抑制剂工作溶液（足以用于 16 孔试纸），将 10 µl 组织蛋白酶 L 抑制剂添加到 990 µl 稀释液中。•底物工作工作（1X）：用稀释液稀释底物（10 mM）（1：100）。示例：要制备 1 ml 底物工作溶液（足以用于 16 孔试纸），将 10 µl 底物添加到 990 µl 稀释液中。•测试抑制剂：用稀释液将任何测试抑制剂稀释至所需浓度，最终体积为 50 µl。

• 生物样品（例如粗提物）：根据需要使用样品缓冲液稀释样品。通常，建议使用 10-200 µg 蛋白质/50 µl。 • 纯化的组织蛋白酶 L 样品：如果需要，使用样品缓冲液稀释纯化的组织蛋白酶 L。通常，建议的酶量为 10-100 ng/ml。

自收到之日起，将组织蛋白酶 L 对照品储存于 -70°C； 将所有其他未打开的组件存储于 -20°C。初次使用该试剂盒时，在以下条件下这些组件最多可以存储 3 个月：



在 4°C 下存储：检测缓冲液、样品缓冲液稀释液、96 孔板和板密封剂

储存于 -20°C：AMC 校准标准品、CA 074 抑制剂、组织蛋白酶 L 抑制剂底物和还原试剂

在 -70°C 储存：组织蛋白酶 L 对照：初次使用时分装；避免冻/融循环

使用 AMC 校准的分析：建议使用使用线性回归曲线拟合程序的软件包来处理数据。如果没有软件包，则通过在 Y 轴上绘制每种标准物的相对荧光单位（RFU）的平均荧光与在 X 轴上相应的 AMC 浓度的关系来绘制标准曲线，通过图形上的点绘制一条最佳拟合曲线。A.含 CA074 的组织蛋白酶 L 样品的最终 RFU =（含 CA074 的组织蛋白酶 L 样品的原始（初始）RFU 值）-（空白的 RFU）B.含 CA074 和组织蛋白酶 L 抑制剂的组织蛋白酶 L 样品的最终 RFU =（含 CA 074 和组织蛋白酶 L 抑制剂的组织蛋白酶 L 样品的粗 RFU）-（空白的 RFU）C.组织蛋白酶 L 样品的校正 RFU = A 的最终 RFU- B 的最终 RFU。使用最终 RFU，可以从标准曲线内插未知样品的组织蛋白酶 L 活性，并显示为在指定时间段内释放的游离 AMC 量/mg 蛋白。没有 AMC 校准的测定：在存在 CA 074 抑制剂和组织蛋白酶 L 抑制剂的情况下，以及仅在存在 CA 074 抑制剂的情况下，应一式两份并同时在两种不同条件下平行测定所有生物样品。通过RFU 值（仅 CA 074 抑制剂）- RFU 值（CA 074 抑制剂+组织蛋白酶 L 抑制剂），可以计算出初始组织蛋白酶 L 活性（显示为 RFU）。每个样品中的最终组织蛋白酶 L 活性都显示在 RFU 中，并通过从初始 RFU 中减去空白值，然后计算重复样品的平均荧光值得出。如果样品被稀释，则将如上计算的最终组织蛋白酶 L 活性乘以稀释倍数即可获得最终组织蛋白酶 L 活性。

使用高度纯化的组织蛋白酶 L 确定的测定工作范围为 1.56-100 ng/ml 或 0.078-5 ng/测定。

阳性对照
组织蛋白酶 L

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