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用途
sufficient for 96 tests
质量水平
包装
pkg of 1 96-well plate(s)
制造商/商品名称
Calbiochem®
储存条件
OK to freeze
avoid repeated freeze/thaw cycles
protect from light
assay range
sensitivity: 0.63 ng/mL
standard curve range: 0.09-100 ng/mL
输入
sample type tissue
sample type cells
检测方法
fluorometric
运输
wet ice
一般描述
一种用于测定组织蛋白酶B活性的灵敏荧光检测（最大激发波长：~360-380 nm；最大发射波长：~430-460 nm）。组织蛋白酶B是一种半胱氨酸蛋白酶，与侵袭性增加和恶性细胞表型的发展有关。组织蛋白酶B也与炎症性气道疾病有关。
特异性
<div class="Bio_doc_image">表3：与其他组织蛋白酶的交叉反应性
</div>
</div>
组分
组织蛋白酶B酶、校准标准品、组织蛋白酶B底物、测定缓冲液、组织蛋白酶B抑制剂、还原试剂、细胞裂解缓冲液、微量滴定板、封板机和用户方案。
警告
毒性：多个毒性值，请参阅MSDS（O）
产品规格
试验时间：30 min
原理
Calbiochem 组织蛋白酶B活性测定试剂盒（荧光）旨在测量组织提取物和细胞裂解物中的组织蛋白酶B活性，并用于筛选组织蛋白酶B抑制剂。
注：最初使用后，应将对照组织蛋白酶B分装成等分试样并储存于-20°C。避免冻融循环
注：最初使用后，应将对照组织蛋白酶B分装成等分试样并储存于-20°C。避免冻融循环
制备说明
• 稀释缓冲液：用dH2O按1:10稀释测定缓冲液示例：将0.5 ml测定缓冲液添加至4.5 ml蒸馏水中。 • 标准品：不含AMC的标准品以2 mM的储备溶液（100X浓缩溶液）的形式提供。为制备校准曲线，制备浓度范围为20 µM至1.25 µM的标准品系列稀释液。示例：标记6个eppendorf管。用移液器吸取495 µl稀释缓冲液到第一个试管中，然后将250 µl移入其余试管中。在第一个试管中加入5 µl的2 mM AMC标准品。涡旋并从该试管转移250 µl至下一个试管。通过将250 µl转移到5号试管进行连续稀释。标记为#6的试管仅包含稀释缓冲液（空白）。•底物工作液：底物应用蒸馏水稀释100倍。示例：为制备2 ml底物溶液，将20 µl底物贮备液添加至1.98 ml蒸馏水中。 • 活化缓冲液：半胱氨酸以250倍浓缩试剂的形式提供。为了制备活化缓冲液，应将8 µl 1 M半胱氨酸加入2 ml所提供的检测缓冲液中（这足以容纳一半平板）。 • 抑制剂：CA-074抑制剂以10倍储备液的形式提供，应使用活化缓冲液稀释。示例：用90 µl活化缓冲液稀释10 µl储备液，得到100 µl工作溶液。•对照：按照小瓶标签上的指示，用稀释缓冲液稀释对照人组织蛋白酶B。组织蛋白酶B酶应分装成等份，保存于-70°C以保持活性。
如有必要，用检测缓冲液稀释样品。注意：如果测得的FU超过9,000，则应进一步稀释样品。 • 细胞裂解液：用冰冷的PBS洗涤细胞沉淀。添加500-1000 µl细胞裂解缓冲液（每1x107个细胞约1 ml），并在冰上孵育30分钟。在预冷的台式微量离心机中以14,000 x g涡旋并离心裂解物。立即将上清转移至新的微量离心管中，弃去沉淀。在通过BCA蛋白测定法测定蛋白浓度之前，将裂解物按1:5或1:10稀释。
储存及稳定性
按照标签上的指示，将未开封的组件储存在-20°C和-70°C下。所有试剂盒组分一旦打开，可在以下条件下储存：
室温下的测定缓冲液、细胞裂解缓冲液、96孔板和封板机
-20°C下的组织蛋白酶B抑制剂、还原试剂、组织蛋白酶B底物和校准标准品
-70°C下的组织蛋白酶B对照品（等分试样）
室温下的测定缓冲液、细胞裂解缓冲液、96孔板和封板机
-20°C下的组织蛋白酶B抑制剂、还原试剂、组织蛋白酶B底物和校准标准品
-70°C下的组织蛋白酶B对照品（等分试样）
分析说明
获得的数据可以通过两种方式显示：1.以荧光单位表示：通过减去空白值校正所有样品的荧光值，然后计算各样品的平均荧光值，一式两份。对于生物样品，还应减去用抑制剂测定的样品值。或2.以游离AMC/mg总蛋白µmole数/时间（分钟）表示：如上所述计算平均荧光值。绘制AMC标准品的平均荧光值（y轴）与其浓度（以µmole计）（x轴）相关的曲线图。未知样品的组织蛋白酶B活性可以从标准曲线内插。计算每毫克总蛋白和时间单位中游离AMC的量（µmol）。
阳性对照
组织蛋白酶B
组织蛋白酶B
其他说明
Bervar, A., et al. 2003.Biol. Chem. 384, 447.
Grigolo, B. et al. 2003.Biomaterials 24, 1751.
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法律信息
CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
WGK
WGK 3
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