抗-PXDN/VPO1抗体

Peroxidasin同源物（EC 1.11.1.7；UniProt Q92626；也称为hsPxd01，黑色素瘤相关抗原MG50，p53反应基因2蛋白，血管过氧化物酶1）由人的PXDN（也称为COPOA，KIAA0230，MG50，PRG2，VPO，VPO1）基因（基因ID 7837）编码。人peroxidasin1（hsPxd01）属于血红素过氧化物酶的超家族，在先天免疫和激素生物合成中具有重要作用，其成员还包括髓过氧化物酶（MPO），嗜酸性粒细胞过氧化物酶（EPO），乳过氧化物酶（LPO）和甲状腺过氧化物酶（TPO）。过氧化物酶1是一种多结构域血红素过氧化物酶，它使用溴化物作为辅因子，通过释放次卤酸来催化胶原IV中硫亚胺键的形成。过氧化物酶1通过催化硫亚胺键的形成，在组织发育和结构中起着至关重要的作用，硫亚胺键为胶原IV支架提供关键的结构增强。人peroxidasin1产生时具有一个信号肽序列（a.a.1-26），去除该信号肽会产生成熟蛋白。hsPxd01在其N末端区域包含四个富含亮氨酸（LRR）的重复序列（a.a.87-180），两侧是两个富含半胱氨酸的结构域，即LRRNT（a.a.27-63）和LRRCT（a.a.192-245），其后是四个C2型Ig样结构域，一个C端血管性假血友病因子C型结构域（VWFC；a.a.1413-1471）发现于许多分泌的细胞外基质蛋白中。

产生针对人VPO1/PXDN蛋白（UniProt Q92626）的两种剪接亚型中存在的N-末端区域序列的多克隆抗体，但在MPO、LPO、EPO和TPO中不保守（Cheng, G., et al. (2011).Free Radic.Biol. Med. 51(7):1445-1453).

对应于人PXDN/VPO1的LRRNT结构域序列的KLH偶联线性肽。

表位：LRRNT结构域。

免疫组化分析：代表性批次的1：400稀释液在小鼠肺组织切片中检测到VPO1（由Guangjie Cheng, M.D., Emory University, GA, U.S.A提供）。
免疫沉淀分析：在稳定表达转染的VPO1的HEK293细胞的最初20分钟[32S]-Met脉冲标记后20小时，代表性批次免疫沉淀了培养上清液中放射性标记的全部VPO1，而不是细胞裂解物中的放射性标记的VPO1（Cheng, G., et al. (2011).Free Radic.Biol. Med. 51(7):1445-1453）。
蛋白质印迹分析: 通过稳定表达外源转染的VPO1的HEK293细胞的NaBu（目录号567430）处理抑制组蛋白脱乙酰酶后，代表性批次在总细胞裂解物中检测到细胞VPO1，并在浓缩的培养基中检测到分泌的VPO1（Cheng, G., et al. (2011).Free Radic.Biol. Med. 51(7):1445-1453）。
蛋白质印迹分析: 代表性批次在人、小鼠和牛血清样品中检测到VPO1，并在来自LPS或TNF-α刺激的HUVEC的裂解物中检测到时间依赖性细胞VPO1上调（Cheng, G., et al. (2011).Free Radic.Biol. Med. 51(7):1445-1453).

该抗PXDN抗体经验证可用于蛋白质印迹，免疫组化（石蜡），免疫沉淀检测PXDN。

通过蛋白质印迹分析在人血浆中进行了评估。

蛋白质印迹分析：2.0 µg/ml该抗体可在10 µg人血浆中检测到VPO1。

观察值>165 kDa。计算值162.4/165.3 kDa（人亚型1成熟/前体形式）和 77.50 /80.33 kDa（人亚型2成熟/前体形式），162.4/165.1 kDa（小鼠成熟/前体形式）。某些裂解液可能会出现未表征的条带。

在含有0.02%叠氮化钠的0.1 M Tris-甘氨酸缓冲液中纯化的兔多克隆抗体。

浓度：请参考特定批次的数据表。