抗磷酸GLUT-1抗体（Ser226）

溶质载体家族2，促进葡萄糖转运蛋白成员1（UniProt P11166；也称为葡萄糖转运蛋白1型红细胞/脑，GLUT-1，HepG2葡萄糖转运蛋白，人T细胞白血病病毒I和II受体，HTLV-1和HTLV-2的受体）由人的SLC2A1（也称为DYT9，DYT17，DYT18，EIG12，GLUT，GLUT1，HTLVR，GLUT1DS，PED）基因（基因ID 6513）编码。葡萄糖转运蛋白（GLUT-1至GLUT-7）构成了促进细胞葡萄糖摄取的完整膜糖蛋白家族。除了在成人组织中介导葡萄糖摄取外，GLUT1也是胚胎和胎儿组织中的主要葡萄糖转运蛋白。在人类的额叶皮层中发现了两种GLUT-1，55 kDa形式的GLUT1调节葡萄糖从血液穿过血脑屏障（BBB）内皮细胞进入大脑，而 45 kDa形式的GLUT1主要调节无血管神经胶质葡萄糖的摄取。

KLH偶联的线性肽，对应于具有磷酸化Ser226的人GLUT-1的第四个胞质结构域（环6）序列。

表位：第四个胞质域中的pSer226（环6）。

经验证，该抗磷酸GLUT-1抗体（Ser226）可用于蛋白质印迹、肽抑制试验和免疫细胞化学检测磷酸GLUT-1。

肽抑制分析：2.0 µg/mL代表性批次在PMA处理的HeLa细胞裂解物中检测到Ser226磷酸化GLUT-1。抗体与免疫原肽（而对应的非磷酸化肽）的预培养阻断了磷酸GLUT-1条带的检测。
蛋白质印迹分析：代表性批次的1：200稀释液（5 µg/ml）在来自Rat2成纤维细胞的裂解物中检测到TPA诱导的野生型GLUT-1磷酸化，但未检测到带有S226A突变的GLUT-1磷酸化，Rat2成纤维细胞通过逆转录病毒介导的转染表达相应结构（由Dr. Richard C. Wang, UT Southwestern Medical Center, Dallas, TX提供）。
蛋白质印迹分析：代表性批次的1：200稀释液（5 µg/ml）在VEGF处理后，在血清饥饿的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和人主动脉内皮细胞（HAEC）中检测到时间依赖性GLUT-1 Ser226磷酸化诱导（由Dr. Richard C. Wang, UT Southwestern Medical Center, Dallas, TX提供）。
蛋白质印迹分析：代表性批次仅在不存在PKC抑制剂Go 6983（目录号365251）的情况下，在TPA（目录号500582 &524400）处理后检测到人主动脉内皮细胞（HAEC）中PKC激活诱导的GLUT-1 Ser226磷酸化，在存在PKC抑制剂Go 6983的情况下未检测到（Lee, E.E., et al. (2015).Mol.Cell.58(5):845-853）。
蛋白质印迹分析：代表性批次在VEGF或血管紧张肽II处理后，在血清饥饿的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中检测到了时间依赖性GLUT-1 Ser226磷酸化诱导（Lee, E.E., et al. (2015).Mol.Cell.58(5):845-853）。
蛋白质印迹分析：代表性批次在PKC激活剂TPA（目录号500582&524400）处理（目录号365251）后在转染的大鼠2成纤维细胞中检测到外源表达的野生型GLUT-1或K526E突变体的可比性Ser226磷酸化诱导（Lee, E.E., et al. (2015).Mol.Cell.58(5):845-853）。
蛋白质印迹分析：代表性批次在血清饥饿HeLa、人原代心脏内皮细胞、EA.hy926人内皮细胞和bEnd.3小鼠脑内皮细胞中检测到PKC激活剂TPA诱导的GLUT-1 Ser226磷酸化（Lee, E.E., et al. (2015).Mol.Cell.58(5):845-853）。
蛋白质印迹分析：在体外激酶试验中，代表性批次检测到含有野生型GLUT-1环6（第4个胞质域）系列的GST融合蛋白发生PKC催化的Ser226磷酸化，但未检测到含有R223P、R223Q、R223W或S226A突变体的GST-环6融合（Lee, E.E., et al. (2015).Mol.Cell.58(5):845-853）。
蛋白质印迹分析：代表性批次在VEGF处理后，在血清饥饿的人主动脉内皮细胞（HAEC）中检测到了时间依赖性GLUT-1 Ser226磷酸化诱导（Lee, E.E., et al. (2015).Mol.Cell.58（5）：845-853）。
免疫细胞化学分析：代表性批次在TPA（目录号500582&524400）处理后，在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的膜褶中检测到PKC活化诱导的GLUT-1 Ser226磷酸化（Lee, E.E., et al. (2015).Mol.Cell.58(5):845-853）。
注意：在凝胶上样之前，通过在50°C下加热10分钟来处理裂解物样品。避免在高于60°C的温度下加热样品，会导致靶蛋白的聚集。

已通过蛋白质印迹对HeLa细胞裂解液进行了评估。

蛋白质印迹分析：2.0 µg/mL该抗体在PMA处理的HeLa细胞裂解物中检测到了Ser226磷酸化的GLUT-1。

观察值〜50 kDa。经常可以看到45-75 kDa之间的涂抹带型，代表糖基化程度不同的靶条带。

浓度：请参考特定批次的数据表。