抗HNE Michael加成物抗体，还原

脂质过氧化过程中产生的反应性醛可导致氧化应激相关的细胞和组织损伤。α，β-不饱和羰基化合物（例如 4-羟基-2-壬烯醛（HNE）、4-氧代-2-壬烯醛（ONE）和丙烯醛）是由多不饱和脂肪酸（PUFA）氧化生成的，易于与蛋白质上亲核基团相互作用，导致分子内或分子间蛋白质交联。存在两种类型的 HNE 修饰，第一种类型是通过与赖氨酸胺、组氨酸咪唑或半胱氨酸巯基的 1：1 迈克尔加成反应形成的，而第二种类型是通过一个 HNE 与来自两个 N-α-乙酰赖氨酸（NALs）的两个游离胺基同时反应而产生的，即所谓的迈克尔-席夫碱加合物。在后一种情况下，最开始的非荧光 2：1 赖氨酸-HNE 迈克尔加合物-席夫碱进一步经历氧化环化反应，形成荧光 2-羟基-3-亚氨基-1,2-二氢吡咯衍生物，通常称为 HNE 荧光团。可逆形式的 HNE-Lys 迈克尔加合物不稳定，通常使用硼氢化钠（NaBH4）还原来保持蛋白质样品中 Lys HNE 修饰NaBH4 处理的还原稳定作用还用于防止在碰撞诱导解离（CID）和电子转移解离（ETD）MS/MS 过程中4-HNE-Cys 迈克尔加合物通过逆迈克尔加成反应（RMA）丢失 4-HNE。

该多克隆抗血清只有在硼氢化钠还原后才能检测到 HNE 修饰的 BSA。

靶标修饰不是物种特异性的。

硼氢化钠化学还原 HNE 改性的 KLH。

应用注意：
1.ABN249 代替 Calbiochem 393207。预计 ABN249 可用于免疫细胞化学和免疫组化。请参考以下 393207 引文作为这两种类型的应用中样品制备和检测的示例：

Usatyuk, P.V., et al. (2006).J. Biol. Chem. 281(46):35554-35566 (Immunocytochemistry).
McCormack, A.L., et al. (2005).J. Neurochem.93(4):1030-1037 (Immunohistochemistry）。

2.抗 HNE 荧光团，货号 393206，也可用于通过 ELISA、免疫组化和蛋白质印迹法检测 HNE 荧光团。

3.要制备用于蛋白质印迹的阳性对照，请将 2 mg/mL BSA，10 mM KH2PO4，pH 7.4 的溶液中加入 0.1 至 0.5 mM HNE，并在 37°C 下孵育 1 小时。可以通过 224 nm 处 HNE 吸光度的降低（消光系数 13,750/M）来监测反应。在化学反应后，可以通过凝胶过滤和透析去除游离的 HNE。

使用 ABN1348 分析之前，必须先用硼氢化钠（NaBH4）化学还原蛋白质溶液中的 HNE 迈克尔加合物。将新鲜制备的 100 mM NaBH4 ，1 mM NaOH 溶液按 1：9（V：V）添加到蛋白质样品溶液中，使 NaBH4 的最终浓度为 10 mM。在加入 5 至 10 摩尔当量的丙酮淬灭之前，先将蛋白质溶液在室温下放置 10 至 30 分钟。

抗 HNE 迈克尔加合物抗体，还原，货号 ABN249，是一种高度特异性的兔多克隆抗体，其靶向还原形式的 4-羟基-2-壬基迈克尔加合物，并已在蛋白质印迹中进行了测试。

通过蛋白质印迹在还原的 HNE-BSA 中进行了评估。

蛋白质印迹分析：仅在用硼氢化钠还原后（但未在此之前），该抗体以 1:10,000 的稀释度检测到 10 ng HNE 修饰的 BSA。

根据 HNE 修饰蛋白的大小而变化。在某些裂解液中可能会观察到未表征的条带。

替代：钙生物化学 393207

对照
硼氢化钠化学还原的 HNE 修饰的 BSA。

浓度：请参考特定批次的数据表。