抗绿色荧光蛋白抗体

来自维多利亚多管发光水母（Aequorea victoria）的绿色荧光蛋白（GFP）可用作荧光指示剂，用于监测各种细胞系统（包括活生物体和固定组织）中的基因表达。与其他生物发光报告基因不同，GFP在没有底物、辅因子或其他内在或外在蛋白质的情况下发出荧光。纯化的GFP是一种27 kDa的单体，由238个氨基酸组成，当被蓝色或紫外线激发时会发出绿色荧光（最大发射波长为509 nm）。

AB16901是针对来自维多利亚水母的高度纯化的天然GFP制成的。它与天然和重组来源的GFP反应。

含有6-His标签的重组绿色荧光蛋白（GFP）通过镍柱上的亲和色谱，然后在P-100凝胶过滤柱上的色谱高度纯化。 所得产品仅以单个形式存在

免疫印迹： AB16901在表达GFP但不表达GFP的大肠埃希菌裂解液中或在含有GFP表达质粒但未诱导的大肠埃希菌制备的裂解液中检测适当分子量（30kDa）的条带，在用指导表达GFP或tau-GFP融合蛋白的质粒转染的COS或原代神经元或成纤维细胞的裂解液中检测GFP。 当在SDS-PAGE上分级分离来自大鼠脑裂解液（阴性对照）的50μg蛋白时，未检测到任何信号。 当通过ECL或使用DAB的比色测定法用抗鸡辣根过氧化物酶偶联的次级抗体检测时，滴度为10-20,000。

免疫细胞化学： 可以在用指导GFP或GFP融合蛋白表达的质粒转染的细胞中检测到GFP。 不表达GFP的细胞未显示可检测的染色。 使用HRP结合的抗鸡次级Abs测定AB结合，并使用DAB观察。 抗GFP Abs以1-2,500-5,000倍的稀释度使用。 使用PBS（pH 7.4）中的4%甲醛固定细胞。 对于免疫细胞化学，将培养物在室温下于PBS pH7.4中的4%甲醛中固定20分钟。 在室温下，用PBS中的0.2%Triton X-100和2%血清（对应于产生第二抗体的氨基）透化细胞20分钟。 然后将细胞培养物与含有2%血清（如上所述）的PBS中的一级抗血清在4°C下孵育过夜。 使用抗生物素蛋白/生物素/过氧化物酶检测系统检测抗体结合。 在步骤之间将培养物洗涤四次（每次10分钟），并在冰上用0.05%二氨基联苯胺/0.02%过氧化氢溶液显影反应产物8-10分钟。 AB16901已用于检测原代神经元和斑马鱼成纤维细胞中的GFP。

免疫沉淀： 5μg抗体/不超过500μL的细胞裂解液。 由于鸡IgG不会与蛋白A或蛋白G反应，因此使用兔抗鸡二抗捕获或抗鸡微珠很重要。

最佳工作稀释度必须由最终用户确定。

研究子类别
表位标签

研究类别
表位标签 & 一般用途

该抗绿色荧光蛋白抗体经验证可用于IC、IP、WB检测绿色荧光蛋白。

GFP的MW为27 kDa，取决于所检测到的融合蛋白的分子量。

形式：纯化

硫酸铵沉淀

纯化鸡免疫球蛋白溶于含0.02%叠氮化钠的TBS（pH 7.5）中。

未稀释的抗体溶液在2-8°C下可稳定储存约6个月。

在运输过程中，少量产品有时会夹在产品瓶的密封中。对于体积为200μL或更小的产品，我们建议在小瓶的硬质表面上轻轻敲打，或在台式离心机中短暂离心以收集容器′盖中的所有液体。

对照
细胞中表达的GFP融合蛋白

浓度：请参考批次特异性浓缩物的检验报告。

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