胆固醇酯定量试剂盒

通过比色法或荧光法定量测量胆固醇和/或胆固醇酯的灵敏度试验。通过OD=570 nm处的分光光度法或Ex/Em=535/587 nm处的荧光法测量。该测定法可以测量胆固醇本身，通过向反应中添加胆固醇酯酶来测量总胆固醇（胆固醇+胆固醇酯），或者通过从胆固醇加胆固醇酯的总值中减去胆固醇的值来仅测量胆固醇酯。荧光测定可以检测0.02-1 µg/孔，并且比色测定的灵敏度高4-10倍。试剂盒包含足以进行100次测试的试剂。

胆固醇反应缓冲液、胆固醇探针、二甲亚砜、酶混合物、胆固醇酯酶、胆固醇标准品和用户方案。

毒性：多个毒性值，请参阅MSDS（O）

1.血清：推荐的血清体积为0.5-5µl。血清样品应在胆固醇测定缓冲液中稀释10倍。

2.细胞裂解物和组织提取物：在微量匀浆器中，在200 µl氯仿：异丙醇：NP-40（7：11：0.1）中匀浆1 x 10⁶细胞或10 mg组织。在微量离心机中以14,000 rpm离心5-10分钟。避开发白的固体蛋白层，收集有机相（下相）并转移至洁净管中；50°C风干，真空干燥30 min，除去残留氯仿。通过充分涡旋5分钟，将干燥的脂质溶于200 µl胆固醇反应缓冲液中。每次试验使用1-50µ l提取的样品。如果需要更大量的样品，可以扩大提取程序的规模。每次试验使用1-50µ l提取的样品。然后用胆固醇分析缓冲液将体积调节至50 µL/孔。对于未知样品，我们建议测试不同量的样品，以确保读数在标准曲线的线性部分内。

注意：将试剂加热至室温。打开前将所有小瓶短暂离心。
• 胆固醇探针：随时可以使用。使用前加热至室温以解冻DMSO溶液。分装，-20℃冻存；避光。胆固醇探针在-20℃下可稳定长达2个月。
• 胆固醇酯酶：使用前将胆固醇酯酶溶解于220 l胆固醇反应缓冲液中。分装，-20℃冻存。重构的胆固醇酯酶在-20°C下可稳定长达2个月。
• 酶混合物：使用前将酶混合物溶于220 l胆固醇反应缓冲液中。分装，-20℃冻存。重构的酶混合物在-20°C下可稳定长达2个月。
• 标准曲线，比色检测：向180 l胆固醇反应缓冲液中加入20 l胆固醇标准品，将胆固醇标准品稀释至0.5 g/l的浓度；混匀。将指定体积的稀释胆固醇标准品和胆固醇反应缓冲液（见下表）添加到各个指定的标准孔中。
<div class="Bio_doc_image"><p class="title">表1：样品稀释液
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• 标准曲线，荧光检测：向990 l胆固醇反应缓冲液中加入10 l胆固醇标准品，将胆固醇标准品稀释至50 ng/l；混匀。将指定体积的稀释胆固醇标准品和胆固醇反应缓冲液（见下表）添加到各个指定的标准孔中。
<div class="Bio_doc_image">表2：样品稀释液
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注意：对于标准曲线（比色检测和荧光检测），必须将胆固醇酯酶添加到反应混合物中以检测总胆固醇或游离胆固醇。
• 反应混合物：制备以下反应混合物；仅制备足够数量的反应混合物进行试验。每个孔中反应混合物的总体积为50 l。

44 l胆固醇反应缓冲液
2 l 胆固醇探针
2 l酶混合物
2 l 胆固醇酯酶*

*注：胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为胆固醇。如果您只想检测胆固醇，省去胆固醇酯酶。加入胆固醇酯酶后，该测定法可同时检测胆固醇和胆固醇酯。如果您只想检测胆固醇酯，则从胆固醇和胆固醇酯的总值中减去胆固醇的值。

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