ChIPAb+ 泛素化组蛋白H2B - ChIP验证的抗体和引物组

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+泛素组蛋白H2B（克隆56）组包括泛素组蛋白H2B，（克隆56）抗体，阴性对照抗体（纯化的小鼠IgG）和qPCR引物，该引物可扩增人GAPDH基因编码区内的213 bp区域。
泛素组蛋白H2B和阴性对照抗体以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证泛素组蛋白H2B相关染色质的沉淀。

未经其他物种测试。该免疫原序列在广泛的动植物物种中是相同的，因此预期有广泛的交叉反应性。。

识别赖氨酸120上泛素化的组蛋白H2B，但不能识别游离泛素或未修饰状态的组蛋白H2B。

使用的免疫原是对应于人H2B上泛素化位点的分支肽。

表位：Lys120 泛素化位点

染色质免疫沉淀：
使用1 μg正常小鼠IgG或抗泛素化组蛋白H2B抗体和Magna ChIP G试剂盒（目录号17-611），对从HeLa S3细胞制备的超声染色质（每IP 1 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀。
使用GAPDH启动子（阴性）和GAPDH编码（阳性）引物通过qPCR验证了泛素组蛋白H2B相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna G ChIP（目录号17-409）或EZ-ChIP（目录号17-371）协议以获取实验详细信息。

蛋白质印迹分析：
通过电泳分离HeLa细胞裂解物，转移至PVDF，并用抗泛素组蛋白H2B以1:4000的稀释度进行探测（请参见图）。

研究子类别
染色质生物学

组蛋白

研究类别
表观遗传学&核功能

该ChIPAb+泛素化组蛋白H2B-ChIP验证的抗体&引物组方便地包括抗体 &特异性对照PCR引物。

每组25次测定。推荐用于：每个染色质免疫沉淀约1 μg抗体（取决于生物学背景）。

染色质免疫沉淀：
使用1 µg正常小鼠IgG或抗泛素化组蛋白H2B，克隆56抗体和Magna ChIP^® G试剂盒（目录号17-611），对从HeLa S3细胞制备的超声染色质（每IP 1 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀。 使用对照引物通过qPCR验证了泛素化组蛋白H2B相关DNA片段的成功免疫沉淀。
有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna ChIPG（目录号17-409）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

~25 kDa

抗泛素组蛋白H2B，克隆56（小鼠单克隆IgG）。一个小瓶，包含25 μg蛋白G纯化抗体，溶于25 μg的含有0.05%叠氮化钠的50 μLPBS中。 储存于-20°C。

正常小鼠IgG。一个小瓶，包含25 μg纯化小鼠IgG，溶于25 μL储存缓冲液（含0.1%叠氮化钠）中。储存于-20°C。

ChIP引物GAPDH区。一个小瓶含有75 μL的5 μM人GAPDH编码区特异性引物。储存于-20°C。
对于：GGC TCC CAC CTT TCT CAT CC
REV: GGC CAT CCA CAG TCT TCT GG

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议：第一次融化后，在取下瓶盖之前，将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中，并储存于-20°C。避免反复冻融循环，以免损坏IgG和影响产品性能。

对照
包括阴性对照小鼠IgG抗体和人GAPDH编码区特异性引物。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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