ChIPAb+ 二甲基组蛋白H3（Lys9）- ChIP经验证的抗体和引物组

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。 每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+二甲基组蛋白H3（Lys9）组包括抗二甲基组蛋白H3（Lys9）抗体、阴性对照抗体（正常兔血清）和qPCR引物，其可扩增人β珠蛋白基因启动子内的110 bp区域。 二甲基组蛋白H3（Lys9）和阴性对照抗体以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证二甲基组蛋白H3（Lys9）相关染色质的沉淀。

组蛋白的甲基化可以发生在两个不同的残基上：精氨酸或赖氨酸。组蛋白甲基化可以与转录激活或抑制相关，具体取决于甲基化残基。组蛋白H3的赖氨酸9可以通过不同的组蛋白甲基转移酶（HMTs）（例如，SuvH39H1或G9a）单甲基化、二甲基化或三甲基化。该甲基化的赖氨酸可以通过组蛋白脱甲基酶（如JMJD1A，LSD1或JMJD2C）脱甲基。该残基的甲基化主要与转录抑制有关。

二甲基组蛋白H3（Lys9）

二甲基组蛋白H3（Lys9）兔血清是针对含有序列..Rme2KSTG..的KLH-偶联分支合成肽制备的，其中me2K对应于人组蛋白H3残基9的二甲基赖氨酸

表位：二甲基Lys9

二甲基组蛋白H3（Lys9）ChIP验证的抗体&引物组，包括ChIP级抗体 & 特异性对照PCR引物用于H3K9Me2染色质免疫沉淀。

染色质免疫沉淀：
使用4 μL正常兔抗血清或抗二甲基组蛋白H3（Lys9）血清和Magna ChIP A试剂盒（目录号17-610），对从未处理HeLa细胞制备的超声染色质（1 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀（请参见图）。使用位于人β-珠蛋白启动子侧翼的β-珠蛋白ChIP引物或扩增人GAPDH启动子的引物，通过qPCR验证了二甲基组蛋白H3（Lys9）相关DNA片段的成功免疫沉淀，该启动子在HeLa细胞中无转录活性。显示了每个qPCR引物组相对于标准曲线的输入百分比。
请参阅EZ-Magna G ChIP（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案以获取实验详细信息。

蛋白质印迹分析和肽抑制：
HeLa酸提取物通过电泳分离，转移到硝酸纤维素膜上，并用抗二甲基组蛋白H3（Lys9）（1:500，泳道1）探测，或与0.4 μM组蛋白H3肽预孵育，并进行以下修饰：
泳道2：线性未修饰
泳道3：分支未修饰
泳道4：分支三甲基
泳道5：线性三甲基
泳道6：分支二甲基
泳道7：线性二甲基
泳道8：分支单甲基
泳道9：线性单甲基
使用与HRP偶联的山羊抗–兔二抗和化学发光检测系统观察蛋白质

研究子类别
染色质生物学

研究类别
表观遗传学&核功能

25次测定/试剂盒，约4 μL/染色质免疫沉淀

抗二甲基组蛋白H3（Lys9）（兔血清），1小瓶

阴性ChIP对照血清，1小瓶

ChIP引物β-珠蛋白，1小瓶

染色质免疫沉淀：
使用4 μL正常兔抗血清或4 μL抗二甲基组蛋白H3（Lys9）血清和Magna ChIP A（目录号17-610）试剂盒，对未经处理的HeLa细胞（1 X 10⁶细胞当量）制备的超声染色质进行染色质免疫沉淀。
通过qPCR，使用β-珠蛋白人启动子侧翼的对照ChIP引物，验证了二甲基组蛋白H3（Lys9）相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。

17 kDa

二甲基组蛋白H3（Lys9）（兔多克隆血清）。 一个小瓶含有100 μL抗血清（含0.05%叠氮化钠）。

正常兔血清。一个小瓶含有100 uL抗血清（含0.05%叠氮化钠）。

ChIP引物，β-珠蛋白。一个小瓶包含75 μL的5 μM人β-珠蛋白特异性引物。
用于：AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
REV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年

对照
包括阴性对照抗体正常兔血清和对人β-珠蛋白启动子特异性的对照引物。

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