ChIPAb+ 三甲基组蛋白H3（Lys4）- ChIP经验证的抗体和引物组，兔单克隆抗体

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。 每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+三甲基组蛋白H3（Lys4）组包括抗三甲基组蛋白H3（Lys4）抗体，阴性对照抗体（正常兔血清）和qPCR引物，可扩增人GAPDH基因启动子内的166个碱基对区域。 三甲基组蛋白H3（Lys4）和阴性对照抗体以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证三甲基组蛋白H3（Lys4）相关染色质的沉淀。

组蛋白的甲基化可以发生在两个不同的残基上：精氨酸或赖氨酸。组蛋白甲基化可以与转录激活或抑制相关，具体取决于甲基化残基。组蛋白H3的赖氨酸4可以通过不同的组蛋白甲基转移酶（HMTs）（例如，SET1或ASH1）单甲基化、二甲基化或三甲基化。Lys4的甲基化通常与转录激活有关。脱甲基酶LSD1能够使组蛋白H3 Lys4脱甲基。

三甲基化组蛋白H3（Lys4）

三甲基组蛋白H3（Lys4）抗体是针对含有序列…RT[me3K]QT…的BSA偶联合成肽制备的，其中me3K对应于人组蛋白H3的三甲基赖氨酸4

表位：三甲基Lys4

染色质免疫沉淀：
未经处理或紫外线处理（6 hrs，50焦耳/平方米）制备的超声染色质。使用3 μL兔抗三甲基组蛋白H3（Lys4）和Magna ChIP A（目录号17-610）试剂盒对U2OS细胞（每IP 3 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫沉淀。通过qPCR使用包含Sp1结合位点的人p21启动子侧翼的ChIP引物p21通过qPCR验证了三甲基组蛋白H3（Lys4）相关DNA片段的免疫沉淀（请参见图）。
倍数增加是从标准曲线中提取的标准化平均IP量的比率（来自每个染色质样品的输入）。如其他研究中所观察到的，与该启动子相关的三甲基组蛋白（Lys4）免疫沉淀活性随紫外线处理而增加。
请参见EZ-Magna A ChIP（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号#17-371）方案以获得实验详情。

ChIP-seq分析：
使用Magna ChIP HiSens试剂盒（17-10460），3 µL抗三甲基组蛋白H3（Lys4）抗体（目录号17-614）或20 µL蛋白A/G珠和1e6交联HeLa细胞染色质进行染色质免疫沉淀，然后使用磁珠纯化DNA。使用标准规程从Input和ChIP DNA样品制备文库，带Illumina条形码适配器，并在Illumina HiSeq仪器上进行分析。在去除TagDust（http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource）标签后，使用Bowtie（http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml）映射了FastQ文件中的超过188万次读取。使用MACS（http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/）识别峰，并从BigWig和BED文件在UCSC Genome Browser（http://genome.ucsc.edu）中以自定义轨道的形式显示峰和读数。在17-614和07-473数据集中识别出的最高25％峰与HeLa S3的ENCODE H3K4me3 BROAD组蛋白轨迹中识别出的峰有99%重叠。

蛋白质印迹分析和肽抑制：
代表性批次。HeLa酸提取物通过电泳分离，转移到硝酸纤维素膜上，并用抗三甲基组蛋白H3（Lys4）（1:2,000，泳道1）探测或用0.4 μM组蛋白H3肽预孵育，并进行以下修饰：泳道2：单甲基赖氨酸4，泳道3：二甲基赖氨酸4，泳道4：三甲基赖氨酸4。
使用与HRP偶联的山羊抗兔二抗和化学发光检测
系统观察蛋白质（请参见图）。

三甲基组蛋白H3（Lys4）ChIP验证的抗体&引物组，包括ChIP级抗体 & 特异性对照PCR引物用于H3K4Me3染色质免疫沉淀。

研究子类别
染色质生物学

研究类别
表观遗传学&核功能

25次测定/试剂盒，约3 μL/染色质免疫沉淀

抗三甲基组蛋白H3（Lys4）（纯化兔IgG），1小瓶

阴性ChIP对照兔IgG，1小瓶

ChIP引物GAPDH，1小瓶

染色质免疫沉淀：
使用3 μL正常兔IgG或3 μL抗三甲基组蛋白H3（Lys4）单克隆IgG和Magna ChIP A（目录号17-610）试剂盒，对从未处理HeLa细胞制备的超声染色质（1 X 10⁶细胞当量）进行染色质免疫。使用人GAPDH启动子侧翼对照ChIP引物通过qPCR验证了
三甲基组蛋白H3（Lys4）相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。关于实验详细信息，请参阅EZ-Magna A ChIP方案。

17 kDa

形式：纯化

抗三甲基组蛋白H3（Lys4）重组兔单克隆IgG。一个小瓶包含75 μL蛋白A纯化兔IgG，溶于储存缓冲液（0.1 M Tris-甘氨酸（pH 7.4）、0.15 M NaCl、0.05%NaN3，添加40%甘油）中。

正常兔IgG。一个小瓶包含75 μL正常兔IgG。

对照引物。一个小瓶包含75 μL的5 μM人GAPDH特异性引物。
用于：TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年

对照
包括阴性对照抗体纯化兔IgG和对人GAPDH启动子特异性的对照引物。

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