17-614
ChIPAb+ 三甲基组蛋白H3（Lys4）- ChIP经验证的抗体和引物组，兔单克隆抗体
from rabbit
别名:
Chip Rabbit Antibody and primer set, H3K4me3 ChIP, H3K4me3, Histone H3 (tri methyl K4), Histone H3K4me3, Histone H3K4me3 ChIP
生物来源
rabbit
质量水平
克隆
monoclonal
种属反应性
mouse, human
种属反应性（根据同源性预测）
mammals
制造商/商品名称
ChIPAb+
Upstate®
技术
ChIP: suitable (ChIP-seq)
western blot: suitable
同位素/亚型
IgG
NCBI登记号
UniProt登记号
运输
dry ice
基因信息
human ... H3F3B(3021)
一般描述
ChIPAb+三甲基组蛋白H3（Lys4）组包括抗三甲基组蛋白H3（Lys4）抗体，阴性对照抗体（正常兔血清）和qPCR引物，可扩增人GAPDH基因启动子内的166个碱基对区域。 三甲基组蛋白H3（Lys4）和阴性对照抗体以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证三甲基组蛋白H3（Lys4）相关染色质的沉淀。
免疫原
应用
未经处理或紫外线处理（6 hrs，50焦耳/平方米）制备的超声染色质。使用3 μL兔抗三甲基组蛋白H3（Lys4）和Magna ChIP A（目录号17-610）试剂盒对U2OS细胞（每IP 3 X 106细胞当量）进行染色质免疫沉淀。通过qPCR使用包含Sp1结合位点的人p21启动子侧翼的ChIP引物p21通过qPCR验证了三甲基组蛋白H3（Lys4）相关DNA片段的免疫沉淀（请参见图）。
倍数增加是从标准曲线中提取的标准化平均IP量的比率（来自每个染色质样品的输入）。如其他研究中所观察到的，与该启动子相关的三甲基组蛋白（Lys4）免疫沉淀活性随紫外线处理而增加。
请参见EZ-Magna A ChIP（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号#17-371）方案以获得实验详情。
ChIP-seq分析：
使用Magna ChIP HiSens试剂盒（17-10460），3 µL抗三甲基组蛋白H3（Lys4）抗体（目录号17-614）或20 µL蛋白A/G珠和1e6交联HeLa细胞染色质进行染色质免疫沉淀，然后使用磁珠纯化DNA。使用标准规程从Input和ChIP DNA样品制备文库，带Illumina条形码适配器，并在Illumina HiSeq仪器上进行分析。在去除TagDust（http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource）标签后，使用Bowtie（http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml）映射了FastQ文件中的超过188万次读取。使用MACS（http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/）识别峰，并从BigWig和BED文件在UCSC Genome Browser（http://genome.ucsc.edu）中以自定义轨道的形式显示峰和读数。在17-614和07-473数据集中识别出的最高25％峰与HeLa S3的ENCODE H3K4me3 BROAD组蛋白轨迹中识别出的峰有99%重叠。
蛋白质印迹分析和肽抑制：
代表性批次。HeLa酸提取物通过电泳分离，转移到硝酸纤维素膜上，并用抗三甲基组蛋白H3（Lys4）（1:2,000，泳道1）探测或用0.4 μM组蛋白H3肽预孵育，并进行以下修饰：泳道2：单甲基赖氨酸4，泳道3：二甲基赖氨酸4，泳道4：三甲基赖氨酸4。
使用与HRP偶联的山羊抗兔二抗和化学发光检测
系统观察蛋白质（请参见图）。
染色质生物学
表观遗传学&核功能
生化/生理作用
包装
外形
正常兔IgG。一个小瓶包含75 μL正常兔IgG。
对照引物。一个小瓶包含75 μL的5 μM人GAPDH特异性引物。
用于：TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA
制备说明
分析说明
包括阴性对照抗体纯化兔IgG和对人GAPDH启动子特异性的对照引物。
使用3 μL正常兔IgG或3 μL抗三甲基组蛋白H3（Lys4）单克隆IgG和Magna ChIP A（目录号17-610）试剂盒，对从未处理HeLa细胞制备的超声染色质（1 X 106细胞当量）进行染色质免疫。使用人GAPDH启动子侧翼对照ChIP引物通过qPCR验证了
三甲基组蛋白H3（Lys4）相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。关于实验详细信息，请参阅EZ-Magna A ChIP方案。
其他说明
阴性ChIP对照兔IgG，1小瓶
ChIP引物GAPDH，1小瓶
法律信息
免责声明
储存分类代码
10 - Combustible liquids
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Technical Guide to Chromatin Immunoprecipitation: Critical Factors for Success
"Epigenetics describes heritable changes in gene expression caused by non-genetic mechanisms instead of by alterations in DNA sequence. These changes can be cell- or tissue-specific, and can be passed on to multiple generations. Epigenetic regulation enriches DNAbased information, allowing a cell to vary its response across diverse biological and environmental contexts. Although epigenetic mechanisms are primarily centered in the nucleus, these mechanisms can be induced by environmental signals such as hormones, nutrients, stress, and cellular damage, pointing to the involvement of cytoplasmic and extracellular factors in epigenetic regulation."
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