ChIPAb+乙酰化组蛋白H3 (Lys18)-ChIP经验证的抗体和引物组

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+乙酰基组蛋白H3（Lys18）组包括乙酰基组蛋白H3（Lys18）抗体，阴性对照正常兔血清和对照引物，可扩增人GAPDH启动子的166 bp区域。乙酰基组蛋白H3（Lys18）和阴性对照以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证乙酰基组蛋白H3（Lys18）相关染色质的沉淀。

组蛋白H3是参与真核细胞染色质结构的5种主要组蛋白之一。H3具有一个主要的球状结构域和一个长N末端的尾巴，其与核糖体核小体′串珠′结构体的结构有关。

组蛋白H3的乙酰化发生在组蛋白尾部的几个不同的赖氨酸位置，并由称为组蛋白乙酰基转移酶（HATs）的酶家族完成。

识别赖氨酸18乙酰化的组蛋白H3。

KLH缀合的合成肽（GKAPRAcKQLASK-C），对应于在赖氨酸18上乙酰化的酵母组蛋白H3的氨基酸13-23，并添加了C端半胱氨酸便于进行缀合。

染色质免疫沉淀：
代表性批次数据。
使用2 µL正常兔血清或2 µL抗乙酰化组蛋白H3（Lys18）和Magna ChIP^® A试剂盒（目录号17-610），对从HeLa细胞制备的超声染色质（每IP 1 X 10E6细胞当量）进行染色质免疫沉淀。 使用对人GAPDH启动子区域特异的对照引物作为阳性基因座，并使用β-珠蛋白引物作为阴性基因座，通过qPCR验证了乙酰基组蛋白H3（Lys18）相关DNA片段的成功免疫沉淀。 数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna ChIP A（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）协议以获取实验详细信息。
ChIP-测序：
代表性批次数据。
使用Magna ChIP HiSens试剂盒（目录号17-10460），2 µg抗三甲基组蛋白H3（Lys18）抗体（目录号17-10111），20 µL蛋白A/G珠和1e6交联HeLa细胞染色质进行染色质免疫沉淀，然后使用磁珠纯化DNA。使用标准规程从Input和ChIP DNA样品制备文库，带Illumina条形码适配器，并在Illumina HiSeq仪器上进行分析。在去除 TagDust（http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource）标签后，使用 Bowtie（http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml）映射了FastQ文件中的超过1000万次读取。使用 MACS（http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/）识别峰，并从 BigWig 和 BED 文件在 UCSC Genome Browser（http://genome.ucsc.edu）中以自定义轨道的形式显示峰和读数。

蛋白质印迹分析：
代表性批次数据。
用抗乙酰基组蛋白H3（Lys18）（1:10,000稀释度）探测重组组蛋白H3（泳道1，目录号14-494）以及丁酸钠处理（泳道2）和未处理（泳道3）HeLa细胞（目录号17-305）的酸提取物。
箭头表示乙酰基组蛋白H3（Lys18）（17 kDa）。

斑点印迹：
代表性批次数据。
将40 ng和4 ng量的不同修饰的组蛋白肽（见表1）转移至PVDF膜上，并用抗乙酰基组蛋白H3（Lys18）抗体（1:5000稀释度）进行探测。使用与HRP偶联的山羊抗兔IgG和化学发光检测系统可视化蛋白质。显示了60秒曝光的图像。

研究子类别
组蛋白

研究类别
表观遗传学&核功能

该ChIPAb+乙酰基组蛋白H3（Lys18）ChIP验证的抗体&引物组方便地包括抗体 &特异性对照PCR引物。

每组25次测定。推荐用于：每次染色质免疫沉淀约2 μL抗体（取决于生物学背景）。

染色质免疫沉淀：
代表性批次数据。
使用2 µL正常兔血清或2 µL抗乙酰化组蛋白H3（Lys18）和Magna ChIP^® A试剂盒（目录号17-610），对从HeLa细胞制备的超声染色质（每IP 1 X 10E6细胞当量）进行染色质免疫沉淀。 使用对人GAPDH启动子区域特异的对照引物，通过qPCR验证了乙酰基组蛋白H3（Lys18）相关DNA片段的成功免疫沉淀（图1）。
有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna ChIPA（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

17 kDa

抗-乙酰基组蛋白H3（Lys18）（兔多克隆）。一个小瓶含有50 µL兔血清（含0.05%叠氮化钠和30甘油）。储存在-20°C。
正常兔血清。一个小瓶含有100 μL抗血清（含0.05%叠氮化钠）。储存于-20°C。
对照引物，人GAPDH启动子。一个小瓶，包含75 μL 5 μM人GAPDH启动子特异性引物。储存于-20°C。
对于：TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议：第一次融化后，在取下瓶盖之前，将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中，并储存于-20°C。避免反复冻融，其可能会破坏IgG并影响产品性能。注意：冷藏室温度变化至低于-20°C时可能导致含甘油的溶液在储存过程中冻结。

对照
包括阴性对照正常兔血清和对人GAPDH启动子特异性的引物。

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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