Benzonase^®核酸酶常见问题解答

Benzonase^® 核酸酶适用于哪些核酸类型？分离 RNA 时可以使用吗？

Benzonase^® 核酸酶是一种混杂核酸内切酶，可攻击并降解所有形式的 DNA 和 RNA（单链、双链、线性和环状）。

Benzonase^® 核酸酶可用于哪些用途？

用途包括：降低粘度以促进工艺处理（例如，重组蛋白纯化、使用哺乳动物细胞裂解物进行的粘度敏感应用等）； 减少处理前储存的外周血单核细胞 (PBMC) 样品结块； 形成包涵体以实现蛋白质成功复性； 以及在二维 SDS-PAGE 之前从样品中去除带负电荷的核酸。

Benzonase^®核酸酶如何灭活？如何去除？

使用 EDTA 螯合必需金属离子可以实现可逆抑制。不可逆失活仅可在极端条件下完成（100 mM NaOH，70 °C，30 分钟）。可通过层析法从目标产物中分离Benzonase核酸酶。但这种核酸内切酶较为稳健——如果需要无核酸酶的终产物，我们不建议使用Benzonase。

我的 Benzonase^® 核酸酶忘在工作台上，还可继续使用吗？

我们对 Benzonase 核酸酶进行了广泛的稳定性测试，发现它非常稳定。即使在 37 °C 条件下长时间孵育，Benzonase^® 核酸酶仍能在数月内保持 > 90% 的活性。

我想使用其它缓冲液。Benzonase^®核酸酶发挥完整活性需要满足哪些条件？哪些因素会导致其活性下降？

Benzonase® 核酸酶需要 1-2 mM Mg2+ 才能发挥活性。在单价阳离子浓度 >50%、磷酸盐浓度 >20 mM 和硫酸铵浓度 >25 mM 的情况下，Benzonase 活性会受到抑制（维持大约 50% 的活性）

Benzonase^® 核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物兼容吗？

兼容。但仍需谨慎行事，毕竟许多蛋白酶抑制剂混合物都含 EDTA。EDTA 浓度大于 1 mM 时会抑制 Benzonase 活性。

我的蛋白质不溶，需要在变性条件下进行纯化。Benzonase^® 核酸酶能在尿素溶液中使用吗？

实际上，当尿素浓度未达到 6 M 时，Benzonase^® 核酸酶活性会增加；尿素浓度达到 6 M 后，酶活性首先增加，然后随着时间的推移逐渐下降。尿素达到 7 M 时，Benzonase 核酸酶在 15 分钟后变性，并且失去活性。但在核酸酶失活之前，核酸会先明显降解。提高 Benzonase 核酸酶初始浓度可部分补偿 7 M 尿素浓度影响。

Benzonase^® 核酸酶为什么具有那么多的选型？HC 代表什么? 90% 与 99% 纯度各有何影响？

为满足尽可能广泛的工艺和成本要求，Benzonase^® 核酸酶提供两种纯度等级：I 级（>99% 纯度）和 II 级（>90% 纯度）。两个纯度级均以 25 U/μL 或高浓度 (HC)（定义为 250 U/μL）形式提供。如需批量购买，请联系定制服务部门。

Benzonase^®核酸酶完全降解核酸的最终结果是什么？

Benzonase^® 核酸酶会将核酸完全酶解成长度 2-5 个碱基的 5'-单磷酸末端寡核苷酸。