用于核酸去磷酸化的小牛肠（CIP）碱性磷酸酶

(CIP)
来自小牛小肠

(EC 3.1.3.1) 货号P4978 –20 °C储存

产品描述 产品概要 存储缓冲液 操作步骤： DNA去磷酸化 热灭活 材料 参考文献

产品描述

CIP(Alkaline Phosphatase, Calf Intestinal)常用于脱去DNA、RNA及核糖和脱氧核糖核苷三磷酸上的5’-磷酸基团。5’-磷酸的去除对于防止酶切载体DNA的自身连接是非常有用的。该特性极大降低了克隆步骤中的背景（没有片段插入的质粒）。

产品概要

活性：近10000单位/mL（见特定批次的活性标签）
DNA酶：未检出
切口酶：未检出
RNA酶：未检出
单位定义：一单位在37°C、pH 9.8条件下每分钟可水解1.0 µmol 4-硝基苯磷酸盐（二乙醇胺）。

10X CIP Buffer (C 3225)
1 M NaCl 0.5 M Tris-HCl pH 7.9，25 °C时 0.1 M MgCl₂ 0.01 M二硫苏糖醇

存储缓冲液

10 mM Tris-HCl, pH 8.2
50 mM KCl
1 mM MgCl₂
0.1 mM ZnCl₂
50 %甘油

操作程序：DNA去磷酸化

1. 1X CIP缓冲液溶解DNA（0.5µg DNA/10µL）。
2. 对于5’突出的粘末端DNA加入0.1单位/皮摩尔的CIP；对于3'突出的粘末端或布路姆试剂加入1单位/皮摩尔。
3. 在37 °C孵育60分钟。
4. 苯酚/氯仿（P3803或P2069）提取或凝胶纯化DNA。*
5. 乙醇沉淀法恢复DNA。
   *注意：苯酚提取或凝胶纯化后无需再热灭活。

热灭活

在5mM EDTA中75°C加热10分钟，可使95%以上活性灭活。