解决方案：磷酸化蛋白检测
蛋白磷酸化是一种可逆的翻译后加工，在细胞内信号传递中有非常重要的功能。采用Western Blotting技术检测磷酸化蛋白是探讨信号传导中上游调控、下游功能调整、信息交流及反馈机制等的基本手段。我们提供专用的优质试剂和研究方法，帮助你获得准确、灵敏的磷酸化检测数据。
Bløk®-PO磷酸化检测专用封闭剂
封闭印迹膜上非特异性蛋白结合位点对于降低背景、获得有意义的数据极为重要。尽管牛奶仍是目前最常用的封闭剂，但其中的磷酸化哺乳动物蛋白会带来很高的背景。基于此，采用非蛋白来源的封闭剂对于磷酸化蛋白检测是更为理想的选择。
Bløk®-PO是如何改善检测效果的？
这种化学试剂型封闭剂内含磷酸酶抑制剂有利于保持待检测蛋白的磷酸化状态。
Bløk®-PO检测磷酸化蛋白效果最佳
荧光法检测：将梯度稀释的经EGF刺激的A431细胞裂解液（20-2.5 μg/道，目录号12-110）电泳分离，转印至Immobilon®-FL膜。采用不同封闭剂封闭， 用对应的封闭液分别稀释anti-phosphoserine抗体（克隆号4A4, 1:400, 目录号05-1000, 上）或anti-phosphotyrosine抗体（克隆号4G10, 1:400,目录号05-321, 下）孵育，二抗采用抗小鼠IgG抗体IRDye800conjugated (1:1,000,目录号926-32210)。真空干燥1小时后用Odyssey®扫描仪(LI-COR)扫描。
产品特点
- 无蛋白配方，显著降低背景，改善蛋白检测效果
- 含有磷酸酶抑制剂，保持待检测蛋白的磷酸化状态完好
- 无需为考马斯亮蓝染色额外跑一次电泳
- 性质稳定，室温可存放1年以上
- 不用制备，即用方便
磷酸化抗体
我们提供品类众多的抗体，其中包括超过600种优质的磷酸化特异性检测抗体。这些抗体是探索生物信号通路传导中磷酸化现象的有力工具。
Anti-phospho-MYPT1 抗体 (Thr696)
(目录号ABS45)
Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) 调节GTPase Rho下游的肌动蛋白与肌球蛋白的相互作用, 其中GTPase Rho通过Rho激酶抑制Myosin磷酸酶。MYPT1的磷酸化抑制了Myosin轻链磷酸酶，导致平滑肌收缩相关的钙离子的灵敏化。MYPT1位于应力纤维(stress fiber), 分布于细胞膜附近以及胞间连接处，调节肌浆球蛋白磷酸酶活性。
Western blot检测磷酸化MYPT1.
alyculin/okadaic acid 处理前后（+/-）的NIH3T3细胞抽提液蛋白经电泳分离，转印至PVDF膜，在SNAP i.d.®系统中与Anti-Phospho-MYPT1(Thr696)(1:1,000)和HRP标记驴抗兔二抗孵育，化学发光法检测。箭头所指为Phospho-MYPT1(Thr696) (~130 kDa)。
Anti-phospho-Histone H2A.X (Ser139)抗体，克隆号JBW301
组蛋白H2A.X Ser139位点的磷酸化是细胞遭受DNA损伤时的早期事件。磷酸化的H2A.X帮助启动针对双链结构破坏的DNA修复机制，最后招募p53, 而使细胞周期暂停，完成修复。
在经历DNA损伤的细胞中检测phospho-Histone H2A.X
以细胞毒性试剂etoposide处理Jurkat细胞，再以anti-phospho-Histone H2A.X抗体（Ser139，目录号05-636, 克隆号JBW301）进行检测（绿色，右）；以DAPI进行DNA染色（左）。
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