18个有关血清
的灵魂拷问

师兄,血清里有絮状物,还能用吗?
师姐,血清是不是可以直接放在37度解冻呢?
师兄，血清的颜色和我之前使用的不同,是有什么问题吗?
实验室小萌新们，以后遇到血清相关的问题，可以不用每次都找师兄师姐们求助了。
秘籍在手，每个人都可以成为血清达人。

1.细胞和组织培养为什么需要使用血清?
血清通常作为补充剂，以2-10%的浓度加入培养基中，为细胞提供综合营养、激素、生长和附着因子。血清还可作为细胞培养系统的缓冲液，避免各种因素(包括pH变化、蛋白水解活性或重金属、内毒等)干扰细胞生长或产生毒性作用。

2.胎牛血清和小牛血清有什么区别?
两者采血的供体牛龄不同，胎牛血清是通过对未出生的胎牛心脏穿刺取血获得的血清，而小牛血清是采集自出生后1年内的小牛静脉取血。两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例有所不同，可根据培养的细胞类型选择合适的血清。

3.血清是如何加工的?
血清采集后冷冻运输至加工工厂，解冻并检测细菌、病毒、内毒素和血红蛋白含量等多项指标。选择最优质的血清在无菌环境下进行系列膜过滤无菌处理，然后在无菌环境下进行分装并快速冻存于-20°C，在所有批次验证达到或找过QC标准之前隔离存放。

4.血清的推荐储存温度是多少?
推荐储存于-20°C，使用前的冻存状态是最稳定的。血清不建议储存于无霜冰箱，因为温度循环可能导致瓶体破裂，使产品污染或变质。

5. 如何解冻血清?
血清应该在2-8°C过夜解冻以避免降解，或者在室温条件下，定期轻轻摇动使组分重悬。解冻的血清在加入细胞培养基前应该混合均匀。由于反复冻存会严重影响血清品质，建议将解冻的血清分装成单次使用量并冻存于-20°C。如果储存于2-8°C，应该在2-4周使用。温度超过37°C时会降解营养成分，破坏血清功能。

6.如果血清收到时存在部分解冻,还能继续使用吗?
血清是干冰包装运输，到达时应该是冷冻状态。但是，如果由于运输时间超期导致部分解冻，依然可以继续使用。完全解冻后分装成单次用量进行冻存。

7.血清产品的保质期是多久?
大部分血清产品，在未开封冻存的情况下生产之日起5年，具体可参考瓶身或COA上的信息。

8.培养基中加入血清和所有补充物后可以储存多久?
如果正确无菌操作，添加血清的培养基可以在2-8°C最长储存6周。不论储存时间长短，一旦培养基变得浑浊，应该使用适当的方法丢弃。

9.血清对光敏感吗?
在标准实验室光下正常操作血清不会有太大影响。但血清中确实含有某些对光敏感的组分，因此不建议将血清暴露在高强度或短波光下。

10. 为什么血清会出现浑浊或絮状物质？
血清中出现沉淀的原因很多:
a）反复的冻融会使血清脂蛋白发生变性造成浑浊，可通过分装成单次用量减少冻融来尽量避免此种情况。
b）血清是在低温环境下迅速加工以保持其生长特性，血清中遗留的一些纤维蛋白原在解冻时会转化成纤维蛋白。过量的纤维蛋白在血清中星现为可见的絮状物质，可通过400xg离心移除。不建议通过过滤血清来移除絮状物质，因为滤器可能堵塞，或者意外截留到重要的蛋白质。

11. 牛血清产品检测项目包括内毒素、细菌真菌、霉菌、支原体和噬菌体检测吗?
胎牛血清采用非常严谨的标准检测过这些相关微生物的污染，具体可以参加每批次的CoA。

12. 什么是γ辐照的血清(胎牛血清)?
γ辐照的血清通过暴露于放射性60Co产生的25-40kGy剂量的γ射线来灭活病毒和其他外来微生物(比如支原体)。γ辐照处理不影响血清的理化性质或细胞培养性能。

13. 为什么有些血清是热灭活的?如何热灭活?
哺乳动物血清中天然存在的补体蛋白参与细胞溶解事件、收缩平滑肌从肥大细胞和血小板中释放组胺和激活淋巴细胞和细胞。热灭活破坏了血清中补体的活性，因此免疫学应用，培养胚胎干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时推荐使用。
热灭活方法是在56°C水浴中处理30分钟，并每隔大约10分钟旋转一次瓶子。为了保持精确，可使用一个类似大小的瓶子作为对照，对照瓶内放入同等体积的水，并放置一个温度计，在温度到达56°C时开始计时30分钟。热灭活过程必须小心控制，避免血清中支持细胞和组织繁殖的关键蛋白组分发生降解。

14.为什么血清具有批次间可变性?
血清是从生物来源提取的，其成分会存在批次之间的差异。为了尽可能减少应用变化，我们对每个批次均执行严格的质量检测，使用高质量标准，尽可能确保批间一致性。

15. 胎牛血清的颜色和我之前使用的批次不同会影响血清使用效果吗?
血清的颜色取决于血红蛋白浓度，而该参数的差异不会影响血清的性能。

16. 为什么血清的来源很重要?
血清的来源(或原产地)是指收集未加工血液的国家。不要与血清分离过滤或其他加工处理所在国家混淆，二者可能是不同的。血清供应商的COA文件应该明确写明血清原产地和加工信息。

17. USDA来源和U.S来源血清的区别是什么?
U.S.来源血清是指收集自持续接受USDA检查的美国境内的地区；而USDA来源血清是指收集自美国境外，但经过USDA批准允许进口美国的地区，包括澳大利亚、加拿大、新西兰、智力和中美洲。

18.可溯源性和来源如何影响血清的成本?
“原产地”是指血清采集的国家，“可溯源性”是指追溯血清从源头到生产加工和供应的文件。血清是一种因原产地国家不同而存在价格差异的商品，例如，来源于澳大利亚和新西兰的血清，由于供应量低或/和成本较高，其价格可能高于其他国家来源的血清。

牛血清由于包含丰富的营养成分，通常被添加到细胞培养液中，用于促进和维持脊椎动物、哺乳动物、昆虫及其他物种细胞的生长。牛血清的来源地很多，其中澳大利亚来源的牛血清被公认为是品质更优。